ICS65.020 B15 团 体 标 准 T/JAASS5-2020 蔬菜中甲基对硫磷残留的测定 酶联免疫法 DeterminationofParathion-methylinVegetables byEnzyme-LinkedImmunosorbentAssay 2020－10－12发布 2020－10－12实施 江苏省农学会发布 全国团体标准信息平台 T/JAASS5-2020 目次 前言.......................................................................................................................................................................Ⅲ 1范围...................................................................................................................................................................1 2规范性引用文件...............................................................................................................................................1 3术语和定义.......................................................................................................................................................1 4原理...................................................................................................................................................................1 5试剂与材料.......................................................................................................................................................1 6试样制备...........................................................................................................................................................2 7测定...................................................................................................................................................................2 8结果判定与表述...............................................................................................................................................2 9检测限和特异性.................................................................................................................................................2 全国团体标准信息平台 III前  言 本文件按照GB/T1.1-2020给出的规则起草。 本文件由江苏省农业科学院提出。 本文件由江苏省农学会归口。 本文件起草单位：江苏省农业科学院、南京农业大学、浙江大学、华南农业大学、广东达元绿洲食 品安全科技股份有限公司。 本文件主要起草人：刘凤权、王利民、郭逸蓉、徐振林、华修德、王鸣华、张存政、石松、孙远明。 全国团体标准信息平台 T/JAASS5-2020 1蔬菜中甲基对硫磷残留的测定酶联免疫法 1范围 本文件规定了蔬菜中甲基对硫磷农药的酶联免疫快速检测方法的原理、试剂与材料、试样制备、测 定、结果判定与表述、检测限和特异性。 本文件适用于蔬菜中甲基对硫磷农药残留的快速检测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 3术语和定义 本文件无术语和定义。 4原理 采用间接竞争ELISA方法，在微孔板上包被甲基对硫磷包被抗原，检测样品中残留的甲基对硫磷农 药与微孔板上的包被抗原竞争甲基对硫磷抗体，加入酶标羊抗鼠二抗后，显色剂显色，终止液终止反应。 用酶标仪测定450nm处吸光度，吸光值与检测样品中的甲基对硫磷残留量成负相关。 5试剂与材料 5.1甲基对硫磷酶联免疫检测试剂盒，试剂盒中包括阳性参考品、阴性参考品、甲醇、样品处理液、检 测液、甲基对硫磷抗体溶液、酶标二抗溶液、底物溶液、终止溶液和包被有甲基对硫磷包被源的可拆卸 96孔板，96孔板使用铝箔袋真空干燥密封包装。 5.2除另有规定外，所有试剂均为分析纯，所有实验用水为GB/T6682中规定的二级水。 5.3天平百分之一电子天平 5.4滤纸9cm双圈定性滤纸 5.5微量移液器10μL-200μL、100μL-1000μL 全国团体标准信息平台 T/JAASS5-2020 25.6离心管10mL离心管 5.7容量瓶10mL容量瓶 6试样制备 称取1.0g0.01g大米样品，粉碎后，加入1mL甲醇（5.1），静置15min。加入5mL样品处理液（5.1）， 充分混匀后，利用滤纸（5.4）进行固液分离。滤液转移至10mL容量瓶（5.7）并定容至10mL（样品处 理液冲洗滤纸中的样品）。样品滤液由检测液（5.1）进行2.5倍稀释。 7测定 7.1撕开铝箔袋，根据检测样品数取出一定量的检测微孔板。 7.2用检测液将抗体溶液100倍稀释，并与样品处理液等体积混合后，按照50uL/孔加样，同时设置两 孔阴性参考品（5.1）、两孔阳性参考品（5.1）对照，并设一孔空白（检测液）对照。37℃孵育45min， 并洗板。 7.3用检测液将酶标二抗溶液100倍稀释，按照50uL/孔加样。37℃孵育30min，并洗板。 7.4按照50uL/孔加样，加入底物溶液。 7.5按照25uL/孔加样，加入终止溶液，并在5min之内测定OD450值。 8结果判定与表述 对照阳性参考品OD450平均值、阴性参考品OD450平均值和空白孔的结果，根据竞争免疫法的原 理及微孔板OD450值，按照如下原则进行结果判定： 无效：阳性参考品显色OD450平均值≤0.8或阴性参考品OD450平均值≥0.1； 阳性：样品OD450值与阳性参考品显色OD450平均值的比值≥0.2； 阴性：样品OD450值与阳性参考品显色OD450平均值的比值＜0.2。 9检测限和特异性 9.1检测限：蔬菜中甲基对硫磷的检测限为0.02mg/kg，符合GB2763要求。 9.2特异性：试纸条对杀螟硫磷、甲基毒死蜱、三唑磷、甲基立枯磷等农药的交叉反应均小于1%。 全国团体标准信息平台 T/JAASS5-2020 江苏省农学会团体标准 蔬菜中甲基对硫磷残留的测定酶联免疫法 版权专有不得翻印 全国团体标准信息平台