中华人民共和国国家标准 水质 物质对蚤类（大型蚤） GB/T 13266-91 急性毒性测定方法 Water quality--Determination of the acute toxicity of substance to Daphnia(Daphnia magna straus) 本标准参照采用国际标准ISO6341-1982《水质大型蛋运动抑制的测定》。 本标准用大型蛋Daphnia magna straus（CladoceraCrustacea）为试验生物。测定物质或废水的半 数抑制浓度，半数致死浓度（24h-EC50、24h-LC50或48h-EC50、48h-LC50），用于判断物质或废 水的毒性程度。 适用范围 本标准适用于以下范围： 在试验条件下可溶的化学物质（包括工业原料和产品、食品添加剂、农药、医药等）。 b、工业废水。 c. 生活污水。 d、地表水、地下水。 2原理 2.1 24 h-EC 50.48 h-EC 50 指在24或48h内百分之五十的受试蛋运动受抑制时被测物的浓度。 2.2运动受抑制（Immobilization） 反复转动试验容器，15s之内失去活动能力的大型蚤，被认为运动受抑制。即使其触角仍能活动，也 应算做不活动的个体。 2.324h-LC50.40h-LC50 指在24或48h内百分之五十的受试蛋死亡时被测物的浓度，以受试蛋心脏停止跳动为其死亡标 志。 3试验材料 3.1试验生物为大型蚤【（Daphniamagnastraus）（甲壳纲，枝角亚目））。 保持良好的培养条件，使大型蚤的繁殖被约束在孤雌生殖的状态下（见附录A）。 选用实验室条件下培养3代以上的、出生6～24h的幼蛋为试验蛋。试验蛋应是同一母体的后代。 3.2试验用水： 3.2.1配制人工稀释水为试验用水。新配制的标准稀释水pH为7.8士0.2，硬度250士25mg/L（以 CaCO：计)Ca/Mg比例接近4：1，溶解氧浓度在空气饱和值的80%以上，并不含有任何对大型蚤有毒 的物质。 人工稀释水用电导率10μS/cm（1mS/m）以下的蒸馏水或去离子水（以下简称水）按下述方法配 国家环境保护局1991-09-14批准 1992-08-01实施 513 GB/T13266-91 制。 a.氯化钙溶液 将11.76g氯化钙(CaCl2·2H20)溶于水中稀释至1L。 b.硫酸镁溶液 将4.93g硫酸镁（MgSO，·7H2O)溶于水中稀释至1L。 c.碳酸氢钠溶液 将2.59g碳酸氢钠(NaHCO3)溶于水中稀释至1L。 d．氯化钾溶液 将0.25g氯化钾(KCI)溶于水中稀释至1L。 各取以上四种溶液25mL混合，稀释至1L。必要时可用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节pH值，使 其稳定在7.8士0.2。标准稀释水应容许大型蛋在其中生存至少48h，并尽可能检查稀释水中不含有任 何已知的对大型蛋有毒的物质。例如：氮、重金属、农药、氨或多氯联苯。 3.2.2如果所进行的试验需要使用其他稀释水或改变稀释水的pH，应在试验报告中注明所用稀释水 的性质。要求稀释水的硬度在150～300mg/L（以CaCO：计）范围内，Ca/Mg比例接近4：1。pH不得低 于6.5或不得高于8.5，同一试验pH波动不得大于0.5。 3.3重铬酸钾（KzCr20），分析纯。 4试验液的制备 4.1试验物质溶液的配制 4.1.1试验物质可以是可溶于水的固体、液体或气体，但要求组分一定，具有代表性、重复性 4.1.2易溶于水的试验物质可直接加到稀释水里，也可以溶解在蒸馏水或去离子水中配成贮备液加入 到稀释水中配成试验液，每升稀释水中的贮备液要少于10mL。贮备液应当低温保存。 4.1.3难溶于水的物质，可用适当的方法，将其溶解和分散。包括使用超声波装置及其他低毒溶剂增 溶。如果使用溶剂，溶剂在试验液中的浓度不应超过0.5mg/L，并应在试验的同时设两个对照组，一组 用稀释水，另一组用最大浓度的溶剂。 4.2工业废水试验液的制备 4.2.1样品的采集及处理：采集废水样品时，应将采样瓶充满水样，不留空气。样品采集后应立即进行 试验。如果样品采集后6h之内不能进行试验，则必需将水样冷冻保存（0～4℃），并应尽可能缩短水样 在试验前保存的时间。 4.2.2生产流程用水不稳定的工业废水，应在24h之内，每隔6h瞬时采样一次，分别测定每个样品， 求得其最大毒性。 4.2.3废水样品可以用稀释水稀释配成不同浓度的试验液。 5试验容器和仪器 5.1试验容器可采用100mL小烧杯或结晶Ⅲ等玻璃制品，加盖表面血。为防止玻璃容器对试验物质 的吸附，试验前可用低浓度试验溶液浸泡天。试验结束后立即倒空容器，刷洗、消除任何微量的试验 液。 5.2量简、容量瓶、移液管、吸管、玻璃缸、尼龙筛网等器血。 5.3溶解氧测定仪、pH计、温度计、电导仪。 6’环境条件 6.1试验温度要求基本稳定，变化不超过士1℃。试验前的培养温度要求与试验温度基本一致。毒性试 验在20±1℃或25士1℃下进行。 514