ICS 67.120.30 B 50 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB 37/T 3626—2019 水产品中石油烃的测定 Determination of petroleum hydrocarbons in fishery products 2019 - 07 - 23 发布 山东省市场监督管理局 2019 - 08 - 23 实施 发 布 DB37/T 3626—2019 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 方法原理 ........................................................................... 1 4 分子荧光分光光度法 ................................................................. 1 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 4.6 试剂和材料 ..................................................................... 仪器和设备 ..................................................................... 样品 ........................................................................... 分析步骤 ....................................................................... 结果计算与表示 ................................................................. 检出限、回收率和精密度 ......................................................... 1 2 2 2 2 3 5 紫外分光光度法 ..................................................................... 3 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 试剂和材料 ..................................................................... 仪器和设备 ..................................................................... 分析步骤 ....................................................................... 结果计算与表示 ................................................................. 检出限、回收率和精密度 ......................................................... 3 3 3 3 4 I DB37/T 3626—2019 前 言 本标准按GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由山东省农业农村厅提出并监督实施。 本标准由山东省渔业标准化技术委员会(TC 03)归口。 本标准起草单位：山东省海洋资源与环境研究院、山东省海洋环境监测中心。 本标准主要起草人：孙珊、齐延民、马元庆、张昀昌、王立明、赵玉庭、由丽萍、李佳蕙、董晓晓、 白艳艳、苏博、何鑫、张秀珍。 II DB37/T 3626—2019 水产品中石油烃的测定 1 范围 本标准规定了测定水产品中石油烃的分子荧光分光光度法、紫外分光光度法。 本标准适用于鱼类、甲壳类、贝类等主要水产品可食用部分中石油烃的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 17378 海洋监测规范 GB/T 30891 水产品抽样规范 3 方法原理 试样用氢氧化钠-乙醇水溶液皂化，用二氯甲烷萃取并用氧化铝吸附，蒸发二氯甲烷后使用合适溶 剂溶解；在激发波长310 nm，发射波长345 nm处进行荧光分光光度测定；在波长225 nm处进行紫外分光 光度测定。 4 分子荧光分光光度法 4.1 试剂和材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。 4.1.1 氢氧化钠：优级纯。 4.1.2 无水乙醇：优级纯。 4.1.3 氯化钠。 4.1.4 二氯甲烷：优级纯。 4.1.5 氧化铝：100 目～200 目，取氧化铝于陶瓷蒸发皿，置于马弗炉内 550 ℃下加热 4 h，在炉内冷 却至约 200 ℃后，移入干燥器中冷却至室温，于磨口玻璃瓶内加盖保存。 4.1.6 无水硫酸钠：优级纯，处理过程见 4.1.5。 4.1.7 环己烷：优级纯，荧光强度应不超过标准油品(0.1 mg/mL)相对荧光强度的 1 %。 4.1.8 氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠(4.1.1)240 g 溶于水中，加水至 1 000 mL。 4.1.9 氯化钠溶液：饱和溶液。 4.1.10 石油类标准储备液(1 000 mg/L)。 4.1.11 石油类标准使用液(100 μ g/mL)：移取 5.00 mL 石油类标准储备液 (4.1.10)于 50 mL 容量瓶 中，用环己烷 (4.1.7)稀释至标线，混匀。 1 DB37/T 3626—2019 4.1.12 玻璃层析柱：内径 10 mm，长约 200 mm，清洗干净，干燥后在柱头装入少许玻璃毛或脱脂棉， 待用。 4.1.13 吸附柱：将使用二氯甲烷(4.1.4)浸泡的氧化铝(4.1.5)缓慢倒入玻璃层析柱(4.1.12)，填充高 度约为 100 mm，再加入无水硫酸钠 (4.1.6)，填充高度约为 10 mm。 4.2 仪器和设备 4.2.1 分子荧光光度计：分辨率 1.0 nm，狭缝 1 nm～20 nm，波长范围 200 nm～500 nm，并配有 1 cm 石英比色皿。 4.2.2 分析天平：感量 0.001 g； 4.2.3 旋转蒸发器； 4.2.4 恒温摇床：频率 90 rpm～150 rpm，控温范围 30 ℃～50 ℃； 4.2.5 实验室常用仪器和设备。 4.3 样品 样品的采集和保存等按照GB 17378、GB/T 30891的规定执行。 4.4 分析步骤 4.4.1 工作曲线的测定： a) 分别量取 0 mL、0.10 mL、0.30 mL、0.50 mL、0.70 mL、0.90 mL 油标准使用溶液 (4.1.11) 于具塞圆底瓶中； b) 加入 20 mL 氢氧化钠溶液(4.1.8)和 20 mL 无水乙醇(4.1.2)，放入恒温摇床于 35 ℃中避光振 荡 5 h，至混合均匀； c) 混合液转入锥形分液漏斗中，用 10 mL 二氯甲烷洗涤圆底瓶，合并至锥形分液漏斗中，加 30 mL 饱和氯化钠溶液(4.1.9)和 100 mL 水，剧烈震荡(注意放气)，静置分层 (若分层不好，应延长 静置时间)，收集有机相； d) 用 10 mL 二氯甲烷再萃取一次，合并有机相； e) 35 ℃～45 ℃旋转蒸发近干，用少量二氯甲烷溶解，全量转移至吸附柱(4.1.13)过柱，用 10 mL 二氯甲烷以 2 mL/min 的流速淋洗，收集全部淋洗液，旋转蒸发近干； f) 氮吹吹干，准确加入 10.0 mL 环己烷涡旋混合，待测； g) 以 1 mL 环己烷(4.1.7)代替样品，按照步骤 4.4.1.b)～4.4.1.f)制备空白试样； h) 将环己烷溶液(4.4.1.f)移入 1 cm 石英比色皿内，按选定的仪器参数测定相对荧光强度 (Ii)； 以同样方法测定空白试样(4.4.1.g)相对荧光强度(Ib)；以相对荧光强度(Ii-Ib)为纵坐标，相 应的石油烃的浓度(μ g/mL)为横坐标，绘制工作曲线。 4.4.2 试样的测定：准确称取 2 g～5 g(精确至 0.001 g)试样，按照 4.4.1.b)～4.4.1.f)步骤，制得 分析试样，然后测定分析试样的相对荧光强度(Is)，以(Is - Ib)值从工作曲线上查出相应的石油烃的 浓度。 4.5 结果计算与表示 按下式计算试样中石油烃：  1= (m1×V1)/M1 ...................................... (1) 式中： 1——试样中石油烃的质量分数； m1——从工作曲线上查得的石油烃的浓度，单位为微克每毫升(μ g/mL)； 2 DB37/T 3626—2019 V1——环己烷溶液的体积，单位为毫升(mL)； M1——样品的称取量，单位为克(g)。 4.6 检出限、回收率和精密度 4.6.1 检出限 -6 -6 本方法检出限为0.2×10 ，定量限为0.6×10 。 4.6.2 回收率 本方法回收率范围为90 %～110 %。 4.6.3 精密度 本方法的批内相对标准偏差小于10 %，批间相对标准偏差小于10 %。 5 紫外分光光度法 5.1 试剂和材料 5.1.1 正己烷：优级纯，在紫外波长 225 nm 处，以水作参比，透光率大于 90 %。 5.1.2 石油类标准使用液(100 μ g/mL)：移取 5.00 mL 石油类标准储备液(4.1.11)于 50 mL 容量瓶中， 用正己烷稀释至标线，混匀。 5.2 仪器和设备 5.2.1 紫外分光光度计：可在 225 nm 进行透光率、吸光度检测，配有 1 cm 石英比色皿。 5.2.2 一般实验室常用仪器和设备。 5.3 分析步骤 5.3.1 工作曲线的测定 分别量取0 mL、 0.1