(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211010486.8 (22)申请日 2022.08.23 (71)申请人 张日平 地址 265600 山东省烟台市蓬莱市 登州路 67号 (72)发明人 张日平　 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/02(2006.01) C12Q 1/04(2006.01) G01D 21/02(2006.01) C12R 1/41(2006.01) (54)发明名称 一种大豆根瘤菌 筛选及培养方法 (57)摘要 本发明涉及根瘤菌培养技术领域， 且公开了 一种大豆根瘤菌培养方法， 培养步骤包括： 第一 配制大豆根瘤菌液体培养基， 第二将待培养的根 瘤菌活化接种于液体培养基内进行恒温搅拌培 养， 最后培养得到的根瘤菌置于低温冰箱内进行 保存， 按配重配比称取大豆根瘤菌液体培养基的 原料； 一种大豆根瘤菌筛选方法， 包括以下工作 步骤： 第一步： 筛选种子和消毒； 第二步： 设置播 种地土壤PH值； 第三步： 设置播种地温度湿度环 境； 第四步： 播种作业； 第五步： 取样记录。 50天后 从每组播种地里取出10株进行检测， 检测其生长 状态： 株高、 根部结瘤数量、 根瘤的干重和植株干 重， 最终检测出最适合大豆根瘤菌生长的土壤环 境。 权利要求书1页 说明书5页 CN 115261279 A 2022.11.01 CN 115261279 A 1.一种大豆根瘤菌培养方法， 其特征在于： 培养步骤包括： 第 一配制大豆根瘤菌液体培 养基， 第二将待培养的根瘤菌活化接种于液体培养基内进行恒温搅拌培养， 最后培养得到 的根瘤菌置于低 温冰箱内进行保存， 按配重配比称取大豆根瘤菌液体培养基的原料： 甘露 醇10％、 MgSO0.5％、 NaC10.1 ％、 CaCO4％、 琼脂粉18％、 无氮植物营养液 1％、 微量元素液2％ 和无菌水 76％， 混合溶解均匀得到大豆根瘤菌液体培 养基， 搅拌过程中保持3 0℃恒温。 2.一种大豆根瘤菌 筛选方法， 其特 征在于： 包括以下工作步骤： 第一步： 筛选种子和 消毒； 第二步： 设置播种地土壤PH值； 第三步： 设置播种地温度湿度环境； 第四步： 播种作业； 第五步： 取样记录 。 3.根据权利要求2所述的一种大豆根瘤菌筛选方法， 其特征在于： 所述第一步， 筛选出 成熟大豆种子， 为了防治 大豆根腐病， 使用多菌灵拌种， 用药量为种子重的0.3％， 通过使用 多菌灵对大豆种子进行消毒处 理。 4.根据权利要求2所述的一种大豆根瘤菌筛选方法， 其特征在于： 所述第二步， 对播种 地进行分组， 每组播种地土壤的PH值进行设置， 通过设置不同播种地土壤的PH值来检测土 壤PH值对大豆根瘤菌生长的影响。 5.根据权利要求2所述的一种大豆根瘤菌筛选方法， 其特征在于： 所述第三步， 对播种 地进行分组， 每组播种地土壤湿度值进行设置， 通过设置不同播种地土壤湿度值来检测土 壤湿度对对大豆根瘤菌生长的影响。 6.根据权利要求2所述的一种大豆根瘤菌筛选方法， 其特征在于： 所述第 四步， 将大豆 根瘤菌液在种子重20％的清水中， 然后洒在种子表面， 并充分搅拌， 让大豆根瘤菌液粘在所 有的种子表面， 拌完后24小时内将种子播入湿土中， 避免粘有大豆根瘤菌液 的种子暴露在 太阳光下， 太阳光直射可以杀死大豆根瘤菌液， 种子播入湿土后立即盖土， 防止粘有 大豆根 瘤菌液的种子暴露在外 。 7.根据权利要求2所述的一种大豆根瘤菌筛选方法， 其特征在于： 所述第五步， 粘有大 豆根瘤菌液的种子播入湿土后等待其 发芽长出植株， 对每组播种地中大豆的出芽率和生长 情况进行详细记录， 50天后从每组播种地里取出10株进行检测， 检测其生长状态： 株高、 根 部结瘤数量、 根瘤的干重和植株干重， 以后每隔5天取样一次并对进行检测， 最终检测出最 适合大豆根瘤菌生长的土壤环境。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115261279 A 2一种大豆根瘤菌筛选及培养方 法 技术领域 [0001]本发明涉及根瘤菌 培养技术领域， 尤其涉及一种大豆根瘤菌 筛选及培养方法。 背景技术 [0002]大豆根瘤菌为慢生根瘤菌科、 大豆根瘤菌属,与大豆共生固氮,大豆根瘤菌是一种 活的微生物制剂根瘤内的根瘤菌与豆科植物互利共生,豆科植物通过光合作用制造的有机 物， 一部分供 给根瘤菌； 根瘤菌通过生物固氮制造的氨， 则供 给豆科植物。 [0003]扩大豆科植物—根瘤菌共生体系， 是减少化学氮肥用量的最有效途径， 氮肥是高 能耗产品， 减少化学氮肥的投入， 对于缓解能源紧张有重大意义， 大豆根瘤菌的长生与土壤 环境密不可分， 通过优化播种地土壤环境可以大大提高大豆根瘤菌的产量， 提高共生固氮 效率。 [0004]为此， 我们提出一种大豆根瘤菌 筛选及培养方法。 发明内容 [0005]本发明主要是解决上述现有技术所存在的技术问题， 提供一种大豆根瘤菌筛选及 培养方法。 [0006]为了实现上述目的， 本发明采用了如下技术方案， 一种大豆根瘤菌培养方法， 培养 步骤包括： 第一配制大豆根瘤菌液体培养基， 第二将待培养的根瘤菌活化接种于液体培养 基内进行恒温搅拌培养， 最后培养得到的根瘤菌置于低温冰箱内进行保存， 按配重配比称 取大豆根瘤菌液体培养基的原料： 甘露醇10％、 MgSO0.5％、 NaC10.1％、 CaCO4％、 琼脂粉 18％、 无氮 植物营养液1％、 微量元素液2％和无菌水76％， 混合溶解均匀得到大豆根瘤菌液 体培养基， 搅拌过程中保持3 0℃恒温。 [0007]一种大豆根瘤菌 筛选方法， 包括以下工作步骤： [0008]第一步： 筛选种子和 消毒； [0009]第二步： 设置播种地土壤PH值； [0010]第三步： 设置播种地温度湿度环境； [0011]第四步： 播种作业； [0012]第五步： 取样记录 。 [0013]作为优选， 所述第一步， 筛选出成熟大豆种子， 为了防治大豆根腐病， 使用多菌灵 拌种， 用药量 为种子重的0.3％， 通过使用多菌 灵对大豆种子进行消毒处 理。 [0014]作为优选， 所述第二步， 对播种地进行分组， 每组播种地土壤的PH值进行设置， 通 过设置不同播种地土壤的PH值 来检测土壤PH值对大豆根瘤菌生长的影响。 [0015]作为优选， 所述第三步， 对播种地进行分组， 每组播种地土壤湿度值进行设置， 通 过设置不同播种地土壤 湿度值来检测土壤 湿度对对大豆根瘤菌生长的影响。 [0016]作为优选， 所述第四步， 将大豆根瘤菌液在种子重20％的清水中， 然后洒在种子表 面， 并充分搅拌， 让大豆根瘤菌液粘在所有的种子表面， 拌完后24小时内将种子播入湿土说　明　书 1/5 页 3 CN 115261279 A 3