(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210630736.1 (22)申请日 2022.06.06 (71)申请人 上海市第一人民医院 地址 200080 上海市虹口区海宁路10 0号 (72)发明人 王悍　贺美娟　史向阳　肖婷婷　 (74)专利代理 机构 上海卓阳知识产权代理事务 所(普通合伙) 31262 专利代理师 周春洪 (51)Int.Cl. A61K 9/06(2006.01) A61K 39/39(2006.01) A61K 33/32(2006.01) A61K 47/32(2006.01) A61K 49/12(2006.01) A61K 49/18(2006.01)A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种用于多形性胶质母细胞瘤的诊疗纳米 复合物及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明涉及生物医药技术领域， 具体是一种 用于多形性胶质 母细胞瘤的诊疗纳米复合物及 其制备方法和应用。 其制备方法为： 将沉淀聚合 方法制备的PVCL.COOH  NGs与过量的乙二胺反 应， 通过EDC/NHS偶联反应使PVCL  NGs表面的羧 基转化为氨基， 随后利用NGs胺基团和高锰酸盐 之间的氧化还原 反应得到PVCL ‑MnO2 NGs。 最后， 通过物理封装将免疫佐剂CpG  ODNs加载到PVCL ‑ MnO2 NGs上获得PVCL ‑MnO2‑CpG， 实现MRI引导下 的多形性胶质母细胞瘤的放疗 联合免疫治疗， 在 肿瘤免疫 治疗领域具有潜在的应用价 值。 权利要求书1页 说明书8页 附图13页 CN 114983932 A 2022.09.02 CN 114983932 A 1.一种用于多形性胶质母细胞瘤的诊疗纳米复合物， 其特征在于， 所述多形性胶质母 细胞瘤的诊疗纳米复合物的制备 方法包括如下步骤： (1)将含EDC和NHS的混合溶 液加入到PVCL  NGs水溶液中， 搅拌以活化 羧基； (2)加入EDA反应， PVCL  NGs表面的羧基通过EDC/NHS偶联反应转化为氨基， 得到 PVCL.NH2 NG， 随后透析以去除杂质； (3)将KMnO4水溶液滴加到PVCL  NGs分散体中并连续搅拌过夜； (4)去离子水透析， 获得PVCL ‑MnO2 NGs； (5)将CpG  ODNs加入到PVCL ‑MnO2 NGs水溶液中， 磁力搅拌， 随后离心以去除未载上的 CpG， 收集上清液即得。 2.根据权利要求1所述的诊疗纳米复合物， 其特征在于， 步骤(1)中EDC的浓度为 47.925mg/mL， NHS浓度为28.7 73mg/mL， PVCL  NGs的溶液体积为3 0mL。 3.根据权利要求1所述的诊疗纳米复合物， 其特征在于， 步骤(2)中EDA溶液体积为 200.4 μL， 透析为水透析。 4.根据权利要求1所述的诊疗纳米复合物， 其特征在于： 步骤(3)中PVCL  NGs与KMnO4的 质量比为1:0.5， KMnO4的浓度为5mg/mL； PVCL  NGs的浓度为7mg/mL。 5.根据权利要求1所述的诊疗纳米复合物， 其特征在于， 步骤(5)中PVCL ‑MnO2 NGs的浓 度为5.4mg/mL， NG s与CpG的质量比为1mg:3 0 μg。 6.权利要求1所述的诊疗纳米复合物的制备 方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)将含EDC和NHS的混合溶 液加入到PVCL  NGs水溶液中， 搅拌以活化 羧基； (2)加入EDA反应， PVCL  NGs表面的羧基通过EDC/NHS偶联反应转化为氨基， 得到 PVCL.NH2 NGs， 随后透析以去除杂质； (3)将KMnO4水溶液滴加到PVCL  NGs分散体中并连续搅拌过夜； (4)去离子水透析， 获得PVCL ‑MnO2 NGs； (5)将CpG  ODNs加入到PVCL ‑MnO2 NGs水溶液中， 磁力搅拌， 随后离心以去除未载上的 CpG， 收集上清液即得。 7.权利要求1所述的诊疗纳米复合物在制备治疗多形性胶质母细胞瘤的药物中的应 用。 8.权利要求1所述的诊疗纳米复合物在联合免疫协同治疗多形性胶质母细胞瘤中的应 用。 9.权利要求1所述的诊疗纳米复合物在制备MRI成像的材 料中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114983932 A 2一种用于多形性胶质母细胞瘤的诊疗纳米复合物及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及技术领域， 具体地说， 是一种用于多形性胶质母细胞瘤的诊疗纳米复 合物及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]多形性胶质母细胞瘤(Glioblastoma  multiforme,GBM)是最具侵袭性的恶性脑 癌， 其发病率为3/10万， 5年生存率低于10％。 放疗 是改善GBM临床症状和提高其生存率的不 可或缺的方式。 然而， 放疗依旧存在一定的局限性， 不可避免的副作用， 放疗抵抗的肿瘤微 环境以及免疫抑制细胞的存在， 使得放疗并不能取得较好的成效， 实现对GBM的完全根治。 目前针对胶质瘤的综合治疗方法主要包括手术切除肿瘤联合放疗或替莫唑胺 (temozolomide,TMZ)化疗， 但患者的总生存时间并未得到明显改善， 仍少于15个月。 因此， 亟需找到能够提升基于放疗的抗GBM治疗效果的方法。 [0003]近年来， 免疫疗法的出现为肿瘤的治疗提供了新的思路， 其中放疗联合免疫治疗 的协同作用引起了广泛的关注。 放疗产生的DNA损伤可以被抗原提呈细胞(antigen ‑ presenting  cells,APCs)所识别， APCs将这些损伤片段提呈给淋巴细胞， 促进淋巴细胞的 产生与增殖。 目前,树突状细胞(dendritic  cells,DCs)被认为是最强大且最重要的APCs。 成熟DCs表面分子的表达不会受胶质瘤细胞的影响,且活化的DCs与胶质瘤预后呈正相关。 此外,DNA损伤可以通过环GMP ‑AMP合酶(cyclic  GMP‑AMP synthase,cGAS)/干扰素基因刺 激剂(stimulator  of interferon  genes,STING)信号的激活， 促进I型干扰素(type ‑ Iinterferons,IFN ‑I)的产生,进一步增强放疗诱导的抗肿瘤免疫。 放疗还可以促进细胞因 子和趋化因子的释放， 从而增强DCs,自然杀伤细胞和CD8+T细胞在肿瘤部位 的浸润。 因此， 放疗与免疫治疗的结合可以进一步增强肿瘤部位的免疫反应， 有效改善放疗的抗肿瘤效 果。 在肿瘤免疫治疗中， 免疫佐剂是消除肿瘤的有效方式， 胞嘧啶 ‑磷酸‑鸟嘌呤寡脱 氧核苷 酸(cytosine ‑phosphorothioate ‑guanine oligodeoxynucleotides,CpG  ODNs)被称为最 有效的免疫佐剂， 已被开发用于治疗癌症。 通过模式识别受体toll样受体9(Toll ‑like  receptor  9,TLR9)的激活进行免疫治疗。 CpG  ODNs在病原体基因组中相对常见， 通常充当 被TLR9识别的 “危险信号 ”， 从而激活TLR9相关的信号通路。 TLR9信号通路随后增加促炎性 细胞因子和趋化因子(如肿瘤坏死因子 ‑α,tumor necrosis  factor‑α,TNF‑α )和白介素6 (Interleukin ‑6,IL‑6)的分泌， 增强Th1免疫反应。 在人和小鼠胶质瘤中， TLR9主要表达在 肿瘤周围浸润的免疫细胞(B淋巴细胞,浆细胞样DC s,小胶质细胞和星形胶质细胞)， 但在肿 瘤细胞上的表达量非常低。 因此， CpG  ODNs在抗胶质瘤中发挥作用主要依赖于肿 瘤微环境 中的免疫细胞。 值得注意的是， 与其他T LR(TLR1、 TLR2、 T LR3、 TLR4、 TLR7)配体相比， CpG ‑ODN  s(TLR9配体)在小鼠脑胶质瘤的局部治疗中能达到80％的治愈率， 远远优于其他TLR配体。 然而， 当CpG  ODNs用于新发胶质母细胞瘤或复发性胶质母细胞瘤患者的局 部治疗时， 患者 的生存率并未得到明显改善。 一方面可能是恶性胶质瘤在 免疫逃逸过程中， 分泌了大量免说　明　书 1/8 页 3 CN 114983932 A 3