(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210629994.8 (22)申请日 2022.06.06 (71)申请人 重庆工商大 学 地址 400060 重庆市南岸区学府大道19号 (72)发明人 宋贵英　余滢滢　余翘含　黄曲洗　 刘淑娟　孙林　王国　郭露　邱雨　 梁梓彤　肖美玲　覃春妙　 (74)专利代理 机构 广州科峻专利代理事务所 (普通合伙) 44445 专利代理师 唐海斐 (51)Int.Cl. C12P 21/06(2006.01) C07K 1/36(2006.01) C07K 1/34(2006.01) C07K 1/22(2006.01)C07K 1/20(2006.01) C07K 1/107(2006.01) A23L 33/18(2016.01) A61K 38/01(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 39/06(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 3/02(2006.01) (54)发明名称 一种小麦蛋白源硒螯合肽的制备方法 (57)摘要 本发明涉及一种小麦蛋白源硒螯合肽的制 备方法， 属于功能食品加工技术领域， 包括如下 步骤： （1） 酶解： 将麦胚蛋白粉加水调成悬浮液， 加入碱性蛋白酶酶解后冷却后离心， 收集上清 液； （2） 超滤： 选择截留分子量为3000  Da的超滤 膜除去大分子物质， 收集透过液， 冻干备用； （3） 螯合柱制备： 制备壳聚糖金属螯合亲和层析柱， 使填料充分吸附Se4+； （4） 分离： 将麦胚蛋白酶解 物通过固定金属亲和层析柱， 洗脱金属螯合肽， 收集各组分， 冷冻干燥； （5） 纯化： 利用半制备 RP‑ HPLC‑C18反相高效液相色谱再进 一步分离， 采用 LC/MS液质联用质谱仪分析得出保留时间为 13.85 min处的峰为所述硒螯合特征肽； 该方法 制备的小麦蛋白源硒螯合肽， 能有效提高硒的利 用率， 天然安全无毒副作用。 权利要求书1页 说明书4页 CN 114875101 A 2022.08.09 CN 114875101 A 1.一种小麦蛋白源硒螯合肽的制备 方法， 其特 征在于： 包括如下步骤： （1） 酶解： 称取一定质量的脱脂麦胚蛋白粉， 加水调成质量分数为3 ‑5%的悬浮液， 加入 Alcalase2.4L碱性蛋白酶酶解2 ‑3h， 然后加热到100℃灭酶10min， 冷却后在4500  r/min离 心20 min， 收集上清液； （2） 超滤： 取适量酶解液， 加适量去离子水稀释， 用  0.45 μm 微孔滤膜过滤， 泵入超滤 系统， 选择截留分子量 为3000 Da 的超滤膜除去大分子物质， 收集透过 液， 冻干， 备用； （3） 分离： 将麦胚蛋白酶解物用0.05  mol/L， pH6.0磷酸缓冲液配成10  mg/mL溶液， 通过 固定金属亲和层析柱， 上样量为5  mL， 流速为1mL/min， 检测波长为220  nm， 先用双蒸水洗去 未结合的肽， 再用含  0.1 mol/L NaCl， pH6.0的磷酸 缓冲液洗洗脱出金属螯合肽， 收集各组 分， 冷冻干燥；  （4） 纯化： 利用半制备RP ‑HPLC‑C18反相高效液相色谱再进行进一步分离， 分离条件是 用体积分数为0 ‑50%的乙腈溶液作为洗脱液梯度洗脱， 流速为3  mL/min， 洗脱液至含体积为 100%的水开始， 至体积比50%乙腈和50%水混合液结束， 进行梯度洗脱， 收集体积比为25%乙 腈和75%水的洗脱峰， 采用LC/MS液质联用质谱仪分析得出保留时间为13.85  min处的峰为 所述硒螯合特 征肽。 2.根据权利要求1所述的一种小麦蛋白源硒螯合肽的制备方法， 其特征在于： 步骤 （1） 所述的Alcalase2.4 L碱性蛋白酶添加量 为3‑5%， 酶解温度为5 0‑60℃， 酶解pH值 为9‑10。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114875101 A 2一种小麦蛋白源硒螯 合肽的制备方 法 技术领域 [0001]本发明涉及一种性能稳定、 吸收效率高的小麦蛋白源硒螯合肽的制 备方法， 属于 功能食品加工技 术领域。 背景技术 [0002]硒 （Se） 是我们人体所必 需的微量元素之一， 具有重要的营养生理作用。 人体中硒 的来源主要是食物， 通过食物获得的硒往往不能满足生理的需求， 这将会导致许多疾病的 出现， 研究发现人体中有40多种症状与缺硒有关。 因此， 近年来硒补充剂广受市场青睐。 硒 的补充形式主要包括有机硒和无机硒两种， 其中无机硒主要有亚硒酸钠和硒酸钠， 从金属 矿藏的副产品中获得； 有机硒是指硒的有机化合物， 即硒与碳、 氢、 氧、 氮等有机元素结合， 或是与含有有机元素的物质结合， 蛋白、 含硒氨基酸、 硒醇、 硒醚、 硒酚等以及它们的衍生 物。 研究表明， 无机硒 在人体内极少部 分被吸收， 大部 分随尿液排出体外， 生物利用率低； 相 反， 有机硒的依循蛋氨 酸代谢途径代谢， 参与蛋白的合成， 容易在组织内储存、 吸收， 被人体 吸收后可迅速的被人体利用， 有效改善人体内血硒状况。 [0003]根据中国军事医学科学院硒研究小组最新研究资料显示， 如今许多号称有机硒的 产品质量差别极大， 并非有机硒产品都具有类似的品质及效果， 如无机硒的中毒剂量是 1500 μg/天， 有机硒种 类不同， 中毒剂量也有所差异， 富硒酵母中毒剂量是5000 μg/天， 硒蛋 白以覃类硒和麦硒为主， 其中麦硒研究表明食用安全、 无毒副作用、 无蓄毒、 吸收利用率高、 营养价值高， 是补硒最佳选择。 [0004]我国小麦资源丰富， 成本低廉， 富含优质蛋白及丰富的维生素和膳食纤维， 将蛋白 质酶解为多肽， 可以与硒元素进 行结合， 将无机硒转化为有机硒， 并进一步能够借助多肽在 肠道消化中的吸收、 转运特点以配合物的整体形式被主动吸收。 该螯合肽 还具有抗氧化、 抗 肿瘤、 降血糖等 生物活性， 具有重要的研究意 义。 发明内容 [0005]本发明的目的是提供一种性能稳定、 吸收效率高 的小麦蛋白源硒螯合肽的制备方 法。 [0006]为了达到上述目的， 本发明所采用的技 术方案是： 一种小麦蛋白源硒螯合肽的制备 方法， 包括如下步骤： （1） 酶解： 称取一定质量 的脱脂麦胚蛋白粉， 加水调成质量分数为3 ‑5%的悬浮液， 加入Alcalase2.4L碱性蛋白酶酶解2 ‑3h， 然后加热到100℃灭酶10min， 冷却后在4500 r/ min离心20 min， 收集上清液； （2） 超滤： 取适量酶解液， 加 适量去离子水稀释， 用 0.45 μm 微孔滤膜过滤， 泵入 超滤系统， 选择截留分子量 为3000 Da 的超滤膜除去大分子物质， 收集透过 液， 冻干， 备用； （3） 螯合柱制备： 制备壳聚糖金属螯合亲和层析柱， 用蒸馏水洗3个柱体积， 接着用 0.1 mol/L的亚硒酸钠溶液流洗4个柱体积， 使填料充分吸附 Se4+， 再用蒸馏水洗去未结合说　明　书 1/4 页 3 CN 114875101 A 3