(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210630872.0 (22)申请日 2022.06.06 (71)申请人 郑州大学第一附属医院 地址 450000 河南省郑州市二七区建 设东 路1号 (72)发明人 王发展　秦志海　季天骄　娄筱寒　 潘龙泽　高晓可　 (74)专利代理 机构 郑州亦鼎知识产权代理事务 所(普通合伙) 41188 专利代理师 张夏谦 (51)Int.Cl. A61K 47/54(2017.01) A61K 9/51(2006.01) A61K 47/24(2006.01) A61K 47/18(2006.01)A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种脾脏靶向的纳米药物 (57)摘要 本发明公开了一种脾脏靶向的纳米药物， 包 括疏水性的递送脂质体和包裹在递送脂质体内 部的活性 成分， 所述递送脂质体具有高度的脾脏 靶向性； 所述活性成分包括但不限于： 具有疾病 预防功能的成分、 具有疾病治疗功能成分、 抗原、 免疫调节剂、 营养素、 其他活性成分， 单一成分或 任意组合。 本发 明独辟蹊径对脂质纳米粒进行了 全新设计与调整， 改善了mRNA纳米疫苗在脾脏的 表达， 增强了其体内诱导细胞毒性T淋巴细胞应 答的水平， 发挥了mRNA纳米疫苗高效的免疫抗肿 瘤作用。 权利要求书1页 说明书10页 附图7页 CN 114887070 A 2022.08.12 CN 114887070 A 1.一种脾脏靶向的纳米药物， 其特征在于： 包括疏水性的递送脂质体和包裹在递送脂 质体内部的活性成分， 所述递送脂质体具有高度的脾脏靶向性； 所述活性成分包括但不限 于： 具有疾病预防功能的成分、 具有疾病治疗功能成分、 抗原、 免疫调节剂、 营养素、 其他活 性成分， 单一成分或任意组合。 2.根据权利要求1所述的脾脏靶向的纳米药物， 其特征在于： 所述活性成分具有肿瘤抗 原活性， 为编码肿瘤抗原的核酸类分子 。 3.根据权利要求1所述的脾脏靶向的纳米药物， 其特 征在于： 所述肿瘤包括： 淋巴瘤。 4.根据权利要求1所述的脾脏靶向的纳米药物， 其特 征在于： 所述核酸类分子为mRNA。 5.根据权利要求1所述的脾脏靶向的纳米药物， 其特征在于： 所述核酸类分子为编码卵 清蛋白OV A的mRNA。 6.根据权利要求1所述的脾脏靶向的纳米药物， 其特征在于： 所述mRNA的制备过程包 括： 首先选择模版质粒载体， 插入编码序列构建重组质粒， 经加工得到线性化模板质粒， 再 用mRNA的体外转录试剂盒合成新的重组质粒， 经过加 帽和加尾以增加稳定性， 最后经纯化 得到可供使用的抗原mRNA。 7.根据权利要求1所述的脾脏靶向的纳米药物， 其特征在于： 所述mRNA的制备步骤为： 选择含有MHC  I分子胞内信号肽的模版质粒载体pST1 ‑MITD， 插入编码鸡卵清蛋白的序列构 建质粒pST1 ‑OVA‑MITD， 然后用内切酶线性化质粒模板， 纯化后得到可供制备mRNA的线性化 模板质粒， 再用mRNA的体外转录试剂盒合成OVA ‑mRNA， 新制备的OVA ‑mRNA进行加帽和加尾， 增加mRNA的稳定性和表达效率， 经 纯化得到可 供使用的抗原mRNA。 8.根据权利要求1所述的脾脏靶向的纳米药物， 其特征在于： 所述递送脂质体包含基础 载体和对所述基础载体进行修饰的功能性脂肪酸， 所述功 能性脂肪酸为硬脂酸和/或其类 似物及衍 生物。 9.根据权利要求1所述的脾脏靶向的纳米药物， 其特征在于： 所述递送脂质体中功能性 脂肪酸的摩尔含量 为10％‑80％。 10.根据权利要求1所述的脾脏靶向的纳米药物， 其特征在于： 所述递送脂质体中功能 性脂肪酸的摩尔含量 为60％‑80％。 11.根据权利要求1所述的脾脏靶向的纳米药物， 其特征在于： 所述递送脂质体中功能 性脂肪酸的摩尔含量 为66.7％。 12.一种脾脏靶向的纳米药物 的制备方法， 其特征在于： 分别量取相应配方量的Dlin ‑ MC3‑DMA、 DSPC、 CHO ‑HP、 DMG‑PEG2000和硬脂酸储备液， 混匀后 补加无水乙醇备用， 将配方量 的mRNA溶解在的碳酸盐缓冲液中， 溶解脂质的乙醇溶液和溶解mRNA的碳酸盐缓冲液按照1: 3的体积比例迅速混匀， 室温孵 育30min左右， 之后利用超滤的方法除去乙醇， 即得。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114887070 A 2一种脾脏靶向的纳米药物 技术领域 [0001]本发明涉及分子药物及其制备技 术领域， 尤其涉及靶向药物相关技 术。 背景技术 [0002]肿瘤疫苗的目的是诱导有效的抗原特异性抗肿瘤免疫反应， 延缓肿瘤的进展， 在 体内诱导强效的抗肿瘤免疫应答 仍然是肿瘤疫苗研究领域迫切需要解决的问题。 [0003]尽管肿瘤免疫治疗疫苗的研究已经进行了多年， 但肿瘤疫苗的效果却不尽如人 意， 可能是因为体外制备 的树突状细胞抗原呈递能力较弱， 未能在体内诱导强烈的抗原特 异性T细胞免疫应答。 [0004]信使RNA(mRNA)疫苗是一种新兴的、 最有潜力的肿瘤疫苗， 近年来在 基础研究和临 床试验中得到了广泛的关注]。 作为抗原分子， mRNA可在表达肿瘤抗原的同时激活免疫系 统。 与传统疫苗相比， mRNA疫苗具有安全、 高效、 成本低和可 快速生产的优势。 [0005]然而， 裸mRNA易被降解。 此外， 由于mRNA的阴离子特性， 细胞对mRNA的摄取极为困 难， 最终导致mRNA体内递效率低下。 mRNA疫苗的开 发依赖于有效的递送系统， 既能保护mRNA 不被降解， 又 可改善其体内递送， 从而诱 导强效的抗肿瘤免疫应答。 [0006]脂质纳米粒(LNPs)已成为siRNA和mRNA等核酸类药物分子体内应用的有效递送系 统。 脂质纳米粒装载siRNA制备的基因药物Onpattro和装载mRNA制备的新型冠状病毒mRNA 疫苗已被FDA批准上市。 脂质纳米粒脂质成分的调整可以改变mRNA的体内表达行为。 [0007]脂质纳米粒一般由可电离的脂质， 辅助脂质， 胆固醇， 和聚乙二醇修饰的脂质等组 成。 脂质纳米粒最初主要用于siRNA的递送。 与腺相关病毒和慢病毒等病毒载体相比， 脂质 纳米粒等非病毒 载体具有更优的安全性。 以脂质纳米粒为载体的si RNA药物在2018年被FDA 批准上市， 其给药方式为静脉滴注， 提示脂质纳米粒作为核酸类药物递送载体的安全性和 有效性。 目前， 脂质纳米粒已成为最常用的mRNA疫苗递送载体， 在新型冠状病毒疫苗的开 发 中， 以脂质纳米粒为载体的mRNA疫苗已获批上市， 用于新型冠状病毒的防治。 尽管起步较 晚， 用于肿瘤免疫治疗的mRNA脂质纳米粒疫苗发展迅速， 且已有多谢研究进入临床试验阶 段。 脂质纳米粒可保护mRNA免受体内外RNA酶降解， 改善mRNA在体内的递送及DCs等抗原提 呈细胞中的表达。 装载mRNA的脂质纳米粒静脉注射后主要在肝脏表达， mRNA在脾脏等免疫 器官的表达不足限制了 mRNA肿瘤 疫苗的免疫活性， 提示脂质体作为mRNA疫苗递送载体仍需 要进一步改造。 [0008]脾脏是机体最大的外周免疫器官， 具有造血、 贮血和过滤作用， 也是接受抗原刺激 产生免疫应答的场所。 脾内定居着大量淋巴细胞和其他免疫细胞， 抗原进入脾脏之后， 可被 抗原提呈细胞摄取并提呈给T细胞， 诱导T细胞活化和增殖， 产生致敏T淋巴细胞。 淋巴结作 为外周免疫器官， 同样具有过滤和清除异物的作用， 能处理外来异物性抗原产生免疫应答 并被应用于肿瘤免疫治疗领域。 然而， 淋巴结清除癌细胞的能力较低， 且其是针对来自淋巴 液中的抗原产生免疫应答的场所。 与淋巴结不同， 脾脏是针对血液中的抗原产生免疫应答 的场所， 且90％左右的循环血液要经过脾， 脾脏的这种生物学特性使得利用靶向递送技术说　明　书 1/10 页 3 CN 114887070 A 3