(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210630122.3 (22)申请日 2022.06.06 (71)申请人 山东大学 地址 250199 山东省济南市历城区山大南 路27号 (72)发明人 李福川　许莹莹　王文爽　 (74)专利代理 机构 济南金迪知识产权代理有限 公司 37219 专利代理师 孙振家 (51)Int.Cl. C07K 14/445(2006.01) C12N 15/30(2006.01) C12N 15/70(2006.01) C12N 1/21(2006.01) G01N 33/574(2006.01)A61K 38/17(2006.01) A61K 47/42(2017.01) A61P 35/00(2006.01) C12R 1/19(2006.01) (54)发明名称 一种能特异性识别肝素类结构的蛋白探针 VAR2HP及其编码基因与应用 (57)摘要 本发明涉及一种能特异性识别肝素类结构 的蛋白探针VAR2 HP及其编码基因与应用。 本发明 提供了一种能特异性识别肝素类结构的蛋白探 针VAR2HP， 该蛋白在分子 水平上只与H ep结合， 而 与其他糖胺聚糖CS ‑A， CS‑C， CS‑E， HA， HS， DS等不 结合， 专一性强， 生物相容性好， 无细胞毒性。 在 作为抗癌药物载体使用时， 可与八倍剂量的抗癌 药物达到同样的抗癌效果， 减少抗癌药物用量 后， 可以减少抗癌药物对机体的损伤， 具有广阔 的医药应用前景， 在单独使用时， 也具有抑制细 胞系4T1、 HeLa和HuH ‑7增殖的能力， 表明VAR2HP 自身具有抗肿瘤的潜力。 权利要求书1页 说明书9页 序列表4页 附图9页 CN 114957432 A 2022.08.30 CN 114957432 A 1.一种能特异性识别肝素类结构的蛋白探针VAR2HP， 其特征在于， 所述蛋白探针 VAR2HP的氨基酸序列SEQ  ID NO.1所示。 2.一种能特异性识别肝素类结构的蛋白探针VAR2HP的编码基因， 其特征在于， 核苷酸 序列如SEQ  ID NO.2所示。 3.一种重组表达载体， 该表达载体中插入了权利要求2所述的能特异性识别肝素类结 构的蛋白探针V AR2HP的编码基因。 4.如权利要求3所述的重组表达载体， 其特征在于， 所述表达载体为大肠杆菌表达载 体。 5.一种重组细胞， 在宿主细胞中插入了权利要求2所述的能特异性识别肝素类结构的 蛋白探针V AR2HP的编码基因。 6.如权利要求5所述的重组细胞， 其特 征在于， 所述宿主细胞为大肠杆菌宿主细胞。 7.权利要求1所述能特异性识别肝素类结构的蛋白探针VAR2HP在制备癌症诊断产品中 的应用。 8.权利要求1所述能特异性识别肝素类结构的蛋白探针VAR2HP在制备抗癌药物中的应 用。 9.如权利 要求8所述的应用， 其特征在于， 所述的蛋白探针VA R2HP作为抗癌药物载体使 用。 10.如权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述的蛋白探针VAR2HP作为抗癌药物的主 要活性成分使用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114957432 A 2一种能特异性识别肝素类结构的蛋白探针VAR2HP及其编码基 因与应用 技术领域 [0001]本发明涉及一种能特异性识别肝素类结构的蛋白探针VAR2HP及其编码基因与应 用， 属于生物分析和医学检测技 术领域。 背景技术 [0002]近几十年来， 随着科技的进步， 尽管癌症治疗取得了重大进展， 但癌症仍然是继心 脑血管疾病之后的第二大死亡原因。 化疗是目前常规治疗中有效的治疗方法之一， 但由于 缺乏选择性和耐药性， 其疗效受到限制， 导致利用效率和依从性降低。 靶向治疗被公认为是 最具前瞻性的治疗策略， 包括通过抑制剂直接改变细胞信号， 以及通过靶向分子间接将抗 肿瘤药物传递到癌细胞两种治疗方案。 目前， 配体靶向治疗的分子大多 是细胞表面的蛋白， 如用于靶向治疗乳腺癌的人表皮生长因子受体HER2， 以及用于靶向治疗的叶酸受体FR。 然 而， 肿瘤细胞的异质性， 特别是携带耐药突变体的靶细胞， 往往是靶向治疗失败的主要原 因。 因此， 迫切需要寻找与肿瘤相关的新 抗原/新表位， 以用于癌症的诊断和多靶点治疗。 [0003]糖胺聚糖(Glycosaminoglycans,GAGs)是一种带负电荷的线性杂多糖， 由重复的 己糖醛酸和己糖胺二糖单位构成， 广泛存在于所有哺乳动物细胞表面和细胞基质中。 GAGs 根据二糖单位组成和单糖残基间糖苷键类型的不同被分为四大类： 硫酸软骨素 (Chondroitin  sulfate， CS)/硫 酸皮肤素(Dermatan  sulfate， DS)、 肝素(Heparin， Hep)/硫 酸乙酰肝素(Heparan  sulfate， HS)、 透明质酸(Hyaluronic  acid， HA)和硫酸角质素 (Keratan  sulfate， KS)。 GAGs已被证明参与了各种生理和病理过程。 其结构和数量上的异 常表达与各种癌症的发生、 肿瘤细胞的增殖、 侵袭、 粘附和迁移密切相关， 因此细胞表面的 GAGs有可能被用作各种癌症的诊断和治疗 靶点。 [0004]随着对GAGs结构在肿瘤发生中表达异常的深入研究， 一些基于GAGs的新抗原/新 表位已被确定为潜在的癌症治疗新靶点。 例如， 通过噬菌体展示技术获得的单链可变区片 段抗体(ScFv)NS 4F5能够识别在卵巢癌中的HS序列(GlcNS6S ‑IdoA2S)3， 且该序列在卵巢癌 中存在明显上调趋势； 肝癌细胞表面的Glypican ‑3中HS链中含有的IdoA2S、 GlcNS6S结构序 列， 可以被一种单链抗体HS20特异性识别， 从而阻断Wnt3a/β ‑catenin细胞信 号转导， 并且 显著抑制体内和体外肝癌细胞的增殖。 此外， 高迁移小鼠Lewis肺癌细胞系LM66 ‑H11， 小鼠 骨肉瘤细胞LM8G7和卵巢癌细胞中的CS ‑E表位， 可以被单链抗体GD3G7识别， 其中卵巢癌中 的CS‑E表位已被证明是卵巢癌诊断和治疗的潜在生物标志物。 这些用于识别癌细胞表面 GAGs表位的抗体都是从已建立的半合 成ScFv抗体库中通过噬菌体展示技术筛选获得的， 这 表明噬菌体展示技术在筛选肿瘤细胞GAGs表位蛋白探针的可行性， 然而， GAGs链具有高度 复杂性， 因此有必要开发新的方法筛 选靶向肿瘤GAG s表位的新型探针。 [0005]最近， 在恶性细胞中发现了一种富含GlcUAβ 1 ‑3GalNAc(4 ‑O‑sulfate)的CS ‑A样表 位， 该表位仅在胎盘中过表达， 并且可以被恶性疟原虫VAR2CSA蛋白重组片段ID1 ‑DBL2X‑ ID2a(rVAR2)特异性靶向， rVAR2融合白喉毒素或偶联hemiasterlin可选择性靶向体内肿说　明　书 1/9 页 3 CN 114957432 A 3