(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210634427.1 (22)申请日 2022.06.07 (71)申请人 杭州博医生物医药 科技有限责任公 司 地址 310000 浙江省杭州市余杭区良渚街 道通运街364号2幢501室 (72)发明人 方仪　郭磊　 (74)专利代理 机构 北京东方盛凡知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11562 专利代理师 李彬 (51)Int.Cl. A61K 9/14(2006.01) A61K 31/337(2006.01) A61K 31/704(2006.01) A61K 31/713(2006.01)A61K 47/26(2006.01) A61P 15/14(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 用于靶向抑制三阴性乳 腺癌siRNA联合药物 的纳米递送系统及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明公开了用于靶向抑制三阴性乳腺癌 siRNA联合药物的纳米递送系统及其制备方法和 应用， 属于医学技术领域。 所述纳米递送系统的 制备方法包括： (1)4条DNA单链以相同浓度混合 在TM缓冲液中， 加热至95℃保持10min， 冷却， 形 成四面体结构TND； (2)将OTUD6B  siRNA与所述 TND于37℃混合孵育， 冷却， 得到Td ‑siRNA纳米 粒； (3)将所述Td ‑siRNA与抑制三阴性乳腺癌的 药物混合孵育， 即得终产物。 通过 实验验证， 该纳 米递送系统能够显著的提高抑制三阴性乳腺癌 药物DOX或PTX的治 疗效果。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图4页 CN 115025045 A 2022.09.09 CN 115025045 A 1.一种用于靶向抑制三阴性乳腺癌siRNA联合药物 的纳米递送系统的制备方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)4条DNA单链以相同浓度混合在TM缓冲液中， 加热至95℃保持10min， 冷却， 形成四面 体结构TND； (2)将OTUD6B siRNA与所述TND于 37℃混合孵 育， 冷却， 得到Td ‑siRNA纳米粒； (3)将所述Td ‑siRNA与抑制三阴性乳腺癌的药物混合孵 育， 即得终产物。 2.如权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述4条DNA单链长度均为 63nt， 每条所述单链包含三个序列块， 每个序列块与另外一条单链的序列互补， 杂交， 得到 四个三角形的DNA螺 旋， 即形成所述的四面体结构TND。 3.如权利 要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述TND的每条边为20bp， 每个顶点上有 一个单一的寡核苷酸。 4.如权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述TM缓冲液包括以下组 分： 10mM Tris‑HCl和12.5mM  MgCl2·6H2O， pH 8.0。 5.如权利 要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 冷却条件具体为： 冷却至4℃ 保持20mi n； 步骤(2)中， 冷却条件具体为冷却至4℃保持1h 。 6.如权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 所述OTUD6B  siRNA包括如 SEQ ID NO： 1所示的正 义链和如SEQ  ID NO： 2所示的反义链。 7.如权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 所述OTUD6B  siRNA与所述 TND的摩尔比为1:1。 8.如权利要求1所述的制备 方法， 其特 征在于， 所述药物包括盐酸阿霉素或紫杉醇。 9.如权利要求8所述的制备方法， 其特征在于， 所述盐酸阿霉素或者紫杉醇与所述Td ‑ siRNA的摩尔比为3 00:1。 10.如权利要求1 ‑9任一项所述的制备方法制备的纳米递送系统在制备三阴性乳腺癌 靶向治疗药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115025045 A 2用于靶向抑制三阴性乳腺癌siRNA联合药物的纳米递 送系统 及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及医学技术领域， 特别是涉及用于靶向抑制三阴性乳腺癌siRNA联合药 物的纳米递送系统及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]三阴性乳腺癌(TNB C)是女性生命健康的最主要威胁之一， 然而目前尚无令人满意 的治疗策略。 [0003]去泛素化酶(DUB)是泛素化修饰途径中一类重要的调节分子， 可以通过特异性的 剪切或加工泛素链来控制底物蛋白的稳定性和生物活性， 进而参与机体的生理和病理过 程。 [0004]目前已有超过一百个去泛素化酶被鉴定， 大体可分为六个亚家族(USP、 OTU、 UCH、 MJD、 JAMM和MCPIP)。 OTU(Ovarian  Tumor Proteases)亚家族是D UB中的第二大亚家族， 包含 16个成员分子 。 [0005]针对表观遗传调节剂的新一代药物已经进入临床开发， 比如针对甲基化靶点 HDAC， 已有上市药物I stodax、 Farydak、 Beleodaq、 Zolinza、 西达本胺等。 最早成功的例子 是 2003年美国FDA批准的硼替佐米(一种蛋白酶体抑制剂)用于多发性骨髓瘤的治疗。 [0006]随着近几年国内外纳 米技术研究的快速发展， 特别是越来越多的纳米药物在国内 外上市， 纳米载 药具有的多种优势逐渐 被认知， 具体如下： [0007]1)无免疫原性、 遗传毒性、 细胞毒性； [0008]2)可保证siRNA转染效率高且稳定； [0009]3)可保护siRNA不受血浆或组织细胞中补体及酶的破坏； [0010]4)可提供传统小分子药物和siRNA 协同作用的载体； [0011]将传统抗癌药物通过纳 米技术和RNA疗法结合起来， 对于提高药效具有重要作用， 但是目前还没有 有效的用于靶向治疗三阴性乳腺癌的纳米 体系。 发明内容 [0012]本发明的目的是提供用于靶向抑制三阴性乳腺癌siRNA联合药物的纳 米递送系统 及其制备方法和应用， 以解决上述现有技术存在的问题， 能显著提高抑制三阴性乳腺癌药 物DOX或PTX的治疗效果。 [0013]为实现上述目的， 本发明提供了如下 方案： [0014]本发明提供一种用于靶向抑制三阴性乳腺癌siRNA联合药物的纳 米递送系统的制 备方法， 包括如下步骤： [0015](1)4条DNA单链以相同浓度混合在TM 缓冲液中， 加热至95℃保持10min， 冷却， 形成 四面体结构TND； [0016](2)将OTUD6B siRNA与所述TND于 37℃混合孵 育， 冷却， 得到Td ‑siRNA纳米粒；说　明　书 1/5 页 3 CN 115025045 A 3