(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210637638.0 (22)申请日 2022.06.07 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO： M 202 2511 2022.04.28 (71)申请人 青岛农业大 学 地址 266109 山东省青岛市城阳区长城路 700号 (72)发明人 徐丽丽　陆秀华　郭立忠　杜伟　 冯阳　 (74)专利代理 机构 青岛鼎丞智佳知识产权代理 事务所(普通 合伙) 3727 7 专利代理师 吴春艳　韩耀朋 (51)Int.Cl. C12N 1/14(2006.01) C12P 33/00(2006.01)C07J 41/00(2006.01) A61K 36/07(2006.01) A61P 1/16(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 一株花脸香蘑、 其非糖类提取物的制备及其 应用 (57)摘要 本发明公开了一株花脸香蘑(Lepista   sordida)、 其非糖类提取物的制备及其应用， 该 真菌被命名为蒙花L1， 保藏号为CCTCC  M  2022511。 本发明提供的花脸香蘑的非糖类提取 物的制备方法包括以下步骤： S1、 将上述花脸香 蘑菌体的种子液接种于液体培养基中， 震荡培养 2～4d； S2、 将培养温度降为5～15℃震荡培养24 ～72h； 将培养温度 回复到20 ‑22℃继续培养， 摇 床转速为150rpm/min， 得到初步发酵液； S3、 低温 冷藏处理： 将发酵液存放于1 ‑6℃环境下低温处 理12～96h； S4、 去除菌丝球， 保留上清液； S5、 对 发酵上清液初步纯化处理得到粗提物； 再制备 HPLC纯化， 分离得到精提物。 所述制备方法的操 作简单， 溶剂类型少， 耗时短， 提取效果好， 得到 的精提物具有抗肿瘤和护肝的效果， 该真菌及其 提取物具有很好的应用前 景。 权利要求书1页 说明书8页 序列表1页 附图4页 CN 115058347 A 2022.09.16 CN 115058347 A 1.一株花脸香蘑(Lep ista sordida)， 其特征在于， 被命名为蒙花L1， 保藏号为CCTCC  M  2022511。 2.如权利要求1所述的花 脸香蘑在制备甘 氨胆酸类提取物中的应用。 3.一种花 脸香蘑的非糖 类提取物的制备 方法， 其特 征在于， 该制备 方法包括以下步骤： S1、 将如权利要求1所述的花脸香蘑菌体接种于液体培养基中， 于20 ‑22℃条件下培养 得到种子液， 将种子液接种于液体培 养基中， 震荡培 养2～4d； S2、 接着进行降温处理： 将培养温度降为5～15℃震荡培养24～72h； 再进行复温处理： 将培养温度回复到20 ‑22℃继续培 养60‑80h， 摇床转速为15 0rpm/min， 得到初步发酵 液； S3、 低温冷藏处 理： 将上一 步得到的初步发酵 液存放于1 ‑6℃环境下低温静置12 ～96h； S4、 将经低温冷藏处 理后的发酵 液过滤中的菌 丝球进行去除， 保留上清液； S5、 对上述上清液初步纯化处理， 得到粗提物； 再对粗提物溶液进行制备HPLC纯化， 分 离得到精提物， 即甘 氨胆酸类提取物。 4.根据权利要求3所述的花脸香蘑的非糖类提取物的制备方法， 其特征在于， 步骤S2 中， 降温处 理的条件为： 10℃培 养48h。 5.根据权利要求3所述的花脸香蘑的非糖类提取物的制备方法， 其特征在于， 步骤S3 中， 低温冷藏处 理的条件为： 4℃环境下低温处 理60h。 6.根据权利要求3所述的的花脸香蘑的非糖类提取物的制备方法， 其特征在于， 所述液 体培养基包括以下质量百分数的各组分： 0.1～0.2％的黄腐酸、 10％～20％的麦草汁、 1～ 5％的葡萄糖、 0.1 ‑0.5％酵母粉、 0.1～0.2％的KH2PO4、 0.05～0.1％的MgSO4和0.01～ 0.05％的维生素B1， 溶剂为水。 7.根据权利要求3所述的花脸香蘑的非糖类提取物的制备方法， 其特征在于， 步骤S5 中， 初步纯化处理方法为： 对 上清液进行醇沉， 去沉淀后保留上清液； 透析并留取200 ‑500Da 的上清液， 通过旋转蒸发去除 乙醇和水分后得到粗 提物， 再用乙醇萃取 该粗提物。 8.根据权利要求3所述的花脸香蘑的非糖类提取物的制备方法， 其特征在于， HPLC纯化 采用甲醇 ‑水洗脱体系， 水和甲醇的体积比为1： (4 ‑10)， 提取 液的流速为0.2ml/mi n。 9.一种花脸香蘑的非糖类提取物， 其特征在于， 采用 如权利要求3～8中任一项所述的 方法制备 得到。 10.如权利要求1所述的花 脸香蘑在制备抗肿瘤和护肝药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115058347 A 2一株花脸香蘑、 其非糖类提取物的制备及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及药用真菌提取物领域， 尤其涉及一株花脸香蘑、 其非糖类提取物的制 备及其应用。 背景技术 [0002]花脸香蘑(Lepista  sordida)属于口蘑科、 香蘑属真菌。 其菌盖幼时半球形， 后平 展， 湿润时半透明或水浸状； 边缘内卷， 具不明显的条 纹， 常呈波状或瓣状； 菌肉呈淡紫罗兰 色， 较薄， 菌褶直生， 有时稍弯 生； 菌柄紫罗兰色， 实心， 基部多弯曲； 担孢子宽椭圆形至卵圆 形， 粗糙至具麻点， 无色。 该菌 分布广泛， 夏秋季多在山坡草地、 草原、 菜园、 堆肥等处群生或 近丛生， 常形成草原蘑菇圈。 [0003]花脸香磨不仅具有较高的营养价值， 还有很高的药用价值。 罗心毅等测定了人工 代料栽培的花脸香蘑子实体中18种元素： 指出花脸香磨子实体中含有丰富的人体抗氧化、 增强免疫、 抗衰老的Se、 Zn、 Ge、 Fe等必需微量元素。 而且花脸香磨子实体中含对 人体有害金 属Cd、 Hg、 Pb的含量低于欧洲白林地蘑菇(Agarcussilvoid)、 紫丁香蘑(Lepi staudua)、 网纹 马勃(Lycoperdonperlatum)等25种野生蘑菇约20～100倍。 通过研究比较， 花脸香蘑子实体 中含Se量是中国黑龙江省木兰县新民公社克山病区稻米中Se含量的40倍， 是水果， 蔬菜， 大 米， 玉米， 猪肉， 牛肉， 蛋， 牛奶等的几倍甚至几十倍。 花脸香蘑具有富集硒、 锗 等抗癌抗衰 老 等多种微量元素， 有害重金属元素达到FDA(美国)食品及药物管 理局标准。 作为一种珍稀食 用菌， 花脸香蘑具有重要的药用， 食用开发应用价 值。 [0004]但是， 目前花脸香磨的药用价值的研究主要集中于粗蛋白和粗多糖等大分子物质 成分的研究， 所以目前研究该菌的抗肿瘤和护肝等作用也往往归因于菌丝中的多糖成分； 然而， 本领域现有的研究并未开发花脸香蘑的小分子非糖类活性成分的价值， 也缺少相应 的非糖类活性成分的提取制备和鉴定的方法。 [0005]而甘氨胆酸是一种新发现的肝细胞癌患者的生物标志物， 被发现存在于动物胆汁 中， 能够诱导大鼠肝癌细胞凋亡(黄文方等， 2000)， 提高肿瘤细胞对化疗的耐药性(YL.Lo， 2018)， 还 具有保护视网膜色素上皮细胞免受氧化损伤的功效(2021)， 能显著降低炎症大鼠 血清中一氧化氮的含量， 对急慢 性炎症均有显著的抑制作用(李慧峰， 2006)。 甘氨胆酸还能 提高小鼠肝、 脑组织中MDA和SOD活性， 对机体有一定的抗氧化作用(乌云夫， 2013)。 [0006]目前， 少量现有技术公开了通过化学合成甘氨胆酸的方法， 如公开号为 CN101817860B、 IN6800DELNP2011A的专利， 但是其活性以及应用安全性等方面不如天然甘 氨胆酸； 而目前天然甘氨胆酸主要提取自牛羊鹅等动物的胆汁， 不仅来源有限， 且提取工艺 复杂， 成本较高。 而目前尚未发现从易于繁殖的细菌或真菌中提取甘氨胆酸的任何研究和 报道。 [0007]因此， 现有技 术有待进一步改进。说　明　书 1/8 页 3 CN 115058347 A 3