(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210636409.7 (22)申请日 2022.06.07 (71)申请人 博际生物医药 科技 （杭州） 有限公司 地址 311121 浙江省杭州市余杭区文一西 路1500号健康谷4号楼15层 (72)发明人 王忠　张海洲　 (74)专利代理 机构 广州文冠倪律知识产权代理 事务所(普通 合伙) 44348 专利代理师 何锦标　张玉颖 (51)Int.Cl. C07K 16/46(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 靶向EPCAM和CD3的双特异性 抗体 (57)摘要 本公开为靶向EPCAM和CD3的双特异性抗体， 提供了靶向人EpCam和CD3蛋白质的双特异性抗 体。 这些抗体在抗EpCam  Fab片段和完全IgG抗 CD3抗体之间具有不同长度的接头， 其具有不同 的T细胞结合亲和力， 适用于不同的治 疗情况。 权利要求书1页 说明书13页 序列表5页 附图4页 CN 115109164 A 2022.09.27 CN 115109164 A 1.一种双特异性抗体， 其包括通过四个肽接头融合到完全Fab抗CD3抗体的N端的抗 EpCam抗体的两个Fab片段， 其中 所述两个Fab片段中 的每一个包括： 重链可变区 （VH） ， 其包括包含SEQ  ID NO: 3的氨基 酸序列的V H CDR1、 包含SEQ  ID NO: 4的氨基酸序列的VH  CDR2和包含SEQ  ID NO: 5的氨基 酸序列的VH  CDR3； 以及轻链可变区 （VL） ， 其包括包含SEQ  ID NO: 6的氨基酸序列的VL   CDR1、 包含SEQ  ID NO: 7的氨基酸序列的VL  CDR2和包含SEQ  ID NO: 8的氨基酸序列的VL   CDR3； 所述完全Fab抗CD3抗体包括： VH， 其包括包含SEQ  ID NO: 9的氨基酸序列的VH  CDR1、 包含SEQ ID NO: 10的氨基酸序列的VH  CDR2和包含SEQ  ID NO: 11的氨基酸序列的VH   CDR3； 以及VL， 其包括包含SEQ  ID NO: 12的氨基酸序列的VL  CDR1、 包含SEQ  ID NO: 13的 氨基酸序列的VL  CDR2和包 含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的VL  CDR3； 以及 所述肽接 头每个都具有5 至50个氨基酸残基的长度。 2.根据权利要求1所述的双特异性抗体， 其中每个Fab片段的每个VH都融合至所述完全 Fab抗CD3抗体的VH， 并且每 个Fab片段的每 个VL都融合至所述完全Fab抗CD3抗体的VL。 3.根据权利要求1所述的双特异性抗体， 其中所述完全Fab抗CD3抗体包含IgG1  Fc片 段。 4.根据权利要求3所述的双特异性抗体， 其中所述IgG1  Fc片段与野生型人IgG1  Fc相 比具有降低的效应活性。 5.根据权利 要求3所述的双特异性抗体， 其中所述IgG1  Fc片段包含选自均 根据EU编号 的P329G、 L234A和L23 5A的一个或多个突变。 6.根据权利 要求3所述的双特异性抗体， 其中所述IgG1  Fc片段包含均 根据EU编号的突 变P329G、 L234A和L23 5A。 7.根据权利要求1 ‑6中任一项所述的双特异性抗体， 其中所述肽接头每个都具有5至15 个氨基酸残基的长度。 8.根据权利要求7所述的双特异性抗体， 其中所述肽接头每个都由SEQ  ID NO: 15 （GSGGGGS） 的氨基酸序列组成。 9.根据权利要求1 ‑6中任一项所述的双特异性抗体， 其中所述肽接头每个都具有16至 20个氨基酸残基的长度。 10.根据权利要求9所述的双 特异性抗体， 其 中所述肽接头每个都由SEQ  ID NO: 17 （GS (GGGGS)3） 的氨基酸序列组成。 11.根据权利要求1 ‑6中任一项所述的双特异性抗体， 其中所述肽接头每个都具有21至 35个氨基酸残基的长度。 12.根据权利要求11所述的双特异性抗体， 其中所述肽接头每个都由SEQ  ID NO: 16 （GS(GGGGS)6） 的氨基酸序列组成。 13.一种或多种编码权利要求1 ‑12中任一项所述双特异性 抗体的多 核苷酸。 14.一种包 含权利要求13所述的一种或多种多 核苷酸的细胞。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115109164 A 2靶向EPCAM和C D3的双特异性抗体 技术领域 [0001]本发明属于细胞免疫学领域， 涉及靶向人EpCam和CD3蛋白质的双特异性抗体及其 用途。 背景技术 [0002]上皮细胞粘附分子 （EpCAM） 也称为CD326、 EGP ‑2、 17‑1A、 HEA125、 MK ‑1、 GA733‑2、 EGP34、 KSA、 TROP ‑1、 ESA、 TACSTD1和KS 1/4， 是一种I型跨膜糖 蛋白， 介导钙 非依赖性同型上 皮细胞‑细胞粘附。 EpCAM还参与细胞信号传导、 迁移、 增殖和分化。 [0003]EpCAM是最早发现的肿瘤相关抗原之一。 Ep CAM抗原的独特之处在 于它不是任何主 要粘附分子 （如钙粘蛋白、 选择素或整合素） 家族的成员。 它是一种由314个氨基酸组成的I 型膜蛋白， 其中只有26个面 向细胞质。 EpCAM被假定为是一种同嗜性细胞粘附分子， 干扰钙 粘蛋白介导的细胞 ‑细胞接触。 EpCAM上调 c‑myc、 细胞周期蛋白A和E， 促进细胞周期并增强 细胞增殖。 [0004]EpCAM在不同来源的人类癌中大量且均匀地表达。 前列腺癌和宫颈上皮内瘤变 的 免疫组织化学研究表明， EpCAM表达可随着疾病的进展和增殖而增加。 这种明显的过度 表达 也见于浸润性乳腺癌和卵巢癌患者， 并且是无病生存率和总体生存率低的强预测因子。 在 患有胆囊癌的患者中可以观察到EpCAM过度表达与疾病进展之间的相似的相关性。 此外， EpCAM在从结肠癌、 乳 腺癌、 胰腺癌和前列腺癌中分离出来的癌起始细胞或癌干细胞中过度 表达。 这些数据支持EpCAM作为治疗最常见的人类癌症的免疫 治疗靶点的潜在效用。 [0005]许多EpCAM的抗体已用于免疫治疗， 但值得注意的是， 其中一些由于各种原因在临 床试验中失败。 发明内容 [0006]在各种实施方式中， 本公开提供了靶 向人EpCam和CD3蛋白质的双特异性抗体。 这 些抗体在抗EpCam  Fab片段和完全 （full） IgG抗CD3抗体之间具有不同长度的接头， 其具有 不同的T细胞 结合亲和力， 适用于不同的治疗情况。 [0007]在一些实施方式中， 双特异性抗体采用如图1所示 的形式。 抗EpCam部分可以包括 两个Fab片段 （V H/VL对） ， 而 抗CD3部分可以是完全Fab  IgG抗体 （fu ll Fab IgG antibody） 。 在一些实施方式中， Fab片段的V H/VL匹配 （VH与V H， VL与VL） 完全抗CD3抗体的VH/VL。 在一些 实施方式 中， Fab片段的VH /VL反向匹配 （VH与VL， VL与VH） 完全抗CD3抗体的VH /VL。 [0008]示例性Fab片段可取自Oportuzumab。 示例性抗CD3抗体为SP34。 其对应的VH/VL和 CDR序列如表 2所示。 [0009]在一些实施方式中， 所述部分通过一个或多个肽接头连接。 所述肽接头可以具有 例如2至100、 例如3至90、 4至70或5至50个氨基酸残基的长度， 但不限于此。 在一些实施方式 中， 所述长度为5至15个残基 （例如， GSGGGGS， SEQ  ID NO: 15） 。 在一些实施方式中， 所述长 度为16至20个残基 （例如， GS(GGGGS)3， SEQ ID NO: 17） 。 在一些实施方式中， 所述长度为21说　明　书 1/13 页 3 CN 115109164 A 3