(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210636990.2 (22)申请日 2022.06.07 (71)申请人 中南大学 地址 410083 湖南省长 沙市岳麓区麓山 南 路932号 (72)发明人 曾朝阳　邓湘赢　王忆安　熊炜　 范春梅　晏其佳　石磊　范松青　 张文玲　向波　李夏雨　李桂源　 (74)专利代理 机构 长沙市融智专利事务所(普 通合伙) 43114 专利代理师 袁靖 (51)Int.Cl. C07K 14/00(2006.01) G01N 33/68(2006.01) G01N 33/574(2006.01)A61K 39/395(2006.01) A61K 31/7088(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/04(2006.01) (54)发明名称 多肽及其抗体、 以及检测它们的试剂在制备 鼻咽癌诊断、 预后或治 疗制剂中的应用 (57)摘要 本发明属于肿瘤分子生物学技术领域， 具体 涉及多肽及其抗体、 以及检测它们的试剂在制备 鼻咽癌诊断、 预后或治疗制剂中的应用。 在鼻咽 癌细胞系HNE2、 CNE2和HONE1中进行MTT实验、 基 质胶侵袭实验和划痕愈合实验， circSTX6 ‑144aa 组细胞的增殖、 侵袭迁移能力明显增强， 即过表 达circSTX6 ‑144aa蛋白促进了鼻咽癌细胞的增 殖和侵袭迁移， 该多肽可 以作为鼻咽癌诊断、 预 后的标记物及治疗靶点。 尤其针对circSTX6 ‑ 144aa羧基末端的15个特异氨 基酸设计了多克隆 抗体， 能够特异性的检测细胞内circSTX6 ‑144aa 蛋白质的表达。 该多克隆抗体在鼻咽癌的临床检 测及临床治 疗中具有潜在的应用前 景。 权利要求书1页 说明书10页 序列表2页 附图8页 CN 114920806 A 2022.08.19 CN 114920806 A 1.一种多肽， 其特征在于， 所述多肽的名称为circSTX6 ‑144aa， 氨基酸序列如SEQ  ID  NO.3所示。 2.权利要求1所述的多肽检测试剂在制备用于鼻咽癌诊断和/或预后试剂中的应用。 3.如权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述的鼻咽癌诊断和/或预后试剂包括： 与所 述多肽特异性结合的抗体。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于： 与所述多肽特异性结合的抗体包括： 针对 circSTX6 ‑144aa羧基末端的15个特异 氨基酸设计得到的抗体。 5.一种鼻咽癌诊断和/或预后制剂， 其特征在于， 所述的制剂包含检测多肽circSTX6 ‑ 144aa的试剂； circSTX6 ‑144aa氨基酸序列如SEQ  ID NO.3所示。 6.根据权利要求5所述的制剂， 其特征在于， 检测多肽circSTX6 ‑144aa的试剂含有如权 利要求4所述的与所述多肽特异性结合的抗体。 7.针对circSTX6 ‑144aa羧基末端的15个特异氨基酸设计得到 的抗体在制 备治疗鼻咽 癌的制剂中的应用， circSTX6 ‑144aa氨基酸序列如SEQ  ID NO.3所示。 8.一种用于治疗鼻咽癌的制剂， 其特征在于， 所述的制剂含有如权利要求4所述的与 所 述多肽特异性结合的抗体。 9.针对circSTX6 ‑144aa设计的ASO在制备治疗鼻咽癌的制剂中的应用， circSTX6 ‑ 144aa氨基酸序列如SEQ  ID NO.3所示。 10.一种用于治疗鼻咽癌的制剂， 其特征在于， 所述的制剂包含针对circSTX6 ‑144aa设 计的ASO； 优选ASO的序列如SEQ  ID NO.4所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114920806 A 2多肽及其抗体、 以及检测它们的试剂在制备鼻咽癌诊断、 预后 或治疗制剂中的应用 技术领域 [0001]本发明属于肿瘤分子生物学技术领域， 具体涉及环状RNA  circSTX6编码的蛋白 circSTX6 ‑144aa及其抗体， 以及它 们在制备 鼻咽癌诊断、 预后或者治疗制剂中的应用。 背景技术 [0002]鼻咽癌(Nasopharyngeal  carcinoma， NP C)是我国南方常见的头颈部恶性肿瘤， 有 明显的区域聚集性和人种好发性。 鼻咽癌的发病因素主要包括遗传因素、 EB病毒感染和环 境因素等。 鼻咽癌多为 非角化型鳞癌， 恶性程度较高， 早期即可出现颈部淋巴结转移。 目前， 鼻咽癌的治疗方法主要是放疗、 联合化疗和 手术治疗等， 虽然早期NPC患者的5年总生存率 高达95％， 但鼻咽和颈淋巴结复发率为8.6％～23.7％。 这是由于NPC的发生和发展涉及复 杂的基因调控和多阶段过程， 其分子机制尚不清楚， 加之肿瘤异质性和 放疗抵抗引起的个 体差异， 传统放疗的治疗效果不是非常的理想。 因此， 寻找鼻咽癌的诊断、 预后分子标记物 和治疗靶标至关重要。 [0003]环状RNA(Circular  RNA,circRNA)是由前体(mRNA  precursor  messenger  RNA, pre‑mRNA)反向拼接而形成 的一类不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴并以共价键形 成环状套索结构的非编码RNA分子。 以前的研究 由于技术水平的 限制， 没有发现这部 分环形 RNA的客观存在， 随着深度RNA测序及规模化生物信息技术的发展， 研究者才真正发现在生 物体内大量存在环 化的RNA分子， 环 化RNA由于形成闭合的环状， 在生物体内非常的稳定， 具 有作为诊断标志 物和治疗 靶点的潜力。 [0004]circRNA形成过程可以分为两大类， 即外显子环化(exon  circularization)和内 含子环化(intron  circularization)两 大机制。 Jeck等提出外显子来源的circRNA(exonic   circRNA,ecircRNA)可以分为套索驱动环化(lari at‑driven circularization)和内含子 配对驱动环化(intron ‑pairing‑driven circularization)两种形成方式， 套索驱动环化 是外显子3'端作为剪接 供体(splic e donor)攻击5'端剪接受体(splic e receptor)， Alu区 共价结合而形成套索结构， 套索结构进 行内部拼接后切除内含子形成circRNA； 内含子配对 驱动环化是两个内含子碱基互补配对形成环状结构后， 剪切内含子形成circRNA。 其实 内含 子本身也可以环化， 可以形成内含子来源circRNA(circular  intronic  RNA， ciRNA)。 CircRNA是由前体mRNA反向拼接而形成的一类不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴并 以共价键形式形成的封闭环形结构的非编码RNA分子。 有着高度的稳定性、 保守性、 特异性， 并且含量高的特点。 对于环化RNA的具体功能尚未有明确， 目前只有几种假定的说法1)环状 RNA可以作为 “sponge”海绵吸miRNA， 抑制其功能； 2)circRNA通过碱基互补配对直接调控其 他RNA水平； 3)circRNA与蛋白质结合， 抑制蛋白质活性、 募 集蛋白质复合体的组分或调控蛋 白质的活性 4)circRNA也可作为翻译的模板指导蛋白质的合成。 [0005]近年来越来越多的circRNA被 发现， 目前为止已知的circRNA数目已经达到三万多 个。 circRNA也不再被认 为是错误的RNA转录本， 而是作为非编码RNA研究中的耀眼之星冉冉说　明　书 1/10 页 3 CN 114920806 A 3