(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210636360.5 (22)申请日 2022.06.07 (71)申请人 博际生物医药 科技 （杭州） 有限公司 地址 311121 浙江省杭州市余杭区文一西 路1500号健康谷4号楼15层 (72)发明人 王忠　张海洲　 (74)专利代理 机构 广州文冠倪律知识产权代理 事务所(普通 合伙) 44348 专利代理师 何锦标　张玉颖 (51)Int.Cl. C07K 16/30(2006.01) C07K 16/46(2006.01) C12N 15/13(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01)A61P 35/02(2006.01) (54)发明名称 抗EPCAM抗体和双特异性 抗体 (57)摘要 本公开为抗EPCAM抗体和双特异性抗体， 提 供了一种对人EpCam蛋白具有出色的结合亲和 力 的单域抗体。 这些抗体特别适合被包含在双特异 性抗体中， 例如还靶向免疫细胞上的抗原的抗 体。 权利要求书1页 说明书16页 序列表5页 附图3页 CN 115109160 A 2022.09.27 CN 115109160 A 1.一种对人EpCam蛋白具有特异性的单域抗体或其抗原结合片段， 其包含CDR1、 CDR2和 CDR3， 其中所述CDR1、 CDR2和CDR3分别包含由选自SEQ  ID NO:1‑3的氨基酸序列表示的单域 抗体的CDR 1、 CDR2和CDR3序列。 2.根据权利 要求1所述的单域抗体或其抗原结合片段， 其中所述CDR1、 CDR2和CDR3分别 包含SEQ ID NO: 4‑6、 SEQ ID NO: 7‑9或SEQ ID NO: 10‑12的氨基酸序列。 3.根据权利要求1所述的单域抗体或其抗原结合片段， 其包含选自SEQ  ID NO: 1‑3的 氨基酸序列。 4.根据权利 要求1所述的单域抗体或其抗原结合片段， 其中所述CDR1、 CDR2和CDR3分别 包含SEQ ID NO: 4、 5和6的氨基酸序列。 5.根据权利要求4所述的单域抗体或其抗原结合片段， 其包含SEQ  ID NO: 1的氨基酸 序列。 6.根据权利 要求1所述的单域抗体或其抗原结合片段， 其中所述CDR1、 CDR2和CDR3分别 包含SEQ ID NO: 7、 8和9的氨基酸序列。 7.根据权利要求6所述的单域抗体或其抗原结合片段， 其包含SEQ  ID NO: 2的氨基酸 序列。 8.一种双特异性抗体， 包含权利要求1 ‑7中任一项所述的单域抗体或其抗原结合片段 和对不同于 EpCam的抗原具有特异性的第二 抗体或抗原结合片段。 9.根据权利要求8所述的双特异性 抗体， 其中所述 抗原是人CD3。 10.根据权利要求9所述的双特异性抗体， 其包含四个所述单域抗体， 每个单域抗体都 融合至对人CD3具有特异性的完全Fab抗体的重链可变区 （VH） 或轻链可变区 （VL） 。 11.根据权利要求10所述的双特异性抗体， 其中每个单链结构域抗体都通过肽接头与 VH或VL融合。 12.根据权利要求11所述的双特异性抗体， 其中所述肽接头具有长于4个氨基酸的长 度。 13.根据权利要求11或12所述的双特异性抗体， 其中所述肽接头具有短于50个氨基酸 的长度。 14.一种或多种编码权利要求1 ‑13中任一项所述的抗体或片段的多 核苷酸。 15.一种包 含权利要求14所述的一种或多种多 核苷酸的细胞。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115109160 A 2抗EPCAM抗体和双特异性抗体 技术领域 [0001]本发明属于细胞免疫学领域， 涉及一种对人EpCam蛋白具有特异性的单域抗体及 其用途。 背景技术 [0002]上皮细胞粘附分子 （EpCAM） 也称为CD326、 EGP ‑2、 17‑1A、 HEA125、 MK ‑1、 GA733‑2、 EGP34、 KSA、 TROP ‑1、 ESA、 TACSTD1和KS 1/4， 是一种I型跨膜糖 蛋白， 介导钙 非依赖性同型上 皮细胞‑细胞粘附。 EpCAM还参与细胞信号传导、 迁移、 增殖和分化。 [0003]EpCAM是最早发现的肿瘤相关抗原之一。 EpCAM抗原的独特之处在 于它不是任何主 要粘附分子 （如钙粘蛋白、 选择素或整合素） 家族的成员。 它是一种由314个氨基酸组成的I 型膜蛋白， 其中只有26个面 向细胞质。 EpCAM被假定为是一种同嗜性细胞粘附分子， 干扰钙 粘蛋白介导的细胞 ‑细胞接触。 EpCAM上调 c‑myc、 细胞周期蛋白A和E， 促进细胞周期并增强 细胞增殖。 [0004]EpCAM在不同来源的人类癌中大量且均匀地表达。 前列腺癌和宫颈上皮内瘤变 的 免疫组织化学研究表明， EpCAM表达可随着疾病的进展和增殖而增加。 这种明显的过度 表达 也见于浸润性乳腺癌和卵巢癌患者， 并且是无病生存率和总体生存率低的强预测因子。 在 患有胆囊癌的患者中可以观察到EpCAM过度表达与疾病进展之间的相似的相关性。 此外， EpCAM在从结肠癌、 乳 腺癌、 胰腺癌和前列腺癌中分离出来的癌起始细胞或癌干细胞中过度 表达。 这些数据支持EpCAM作为治疗最常见的人类癌症的免疫 治疗靶点的潜在效用。 [0005]许多EpCAM的抗体已用于免疫治疗， 但值得注意的是， 其中一些由于各种原因在临 床试验中失败。 发明内容 [0006]在各种实施方式中， 本 公开提供了对人EpCam 蛋白具有结合特异性的单域抗体。 这 些抗体可以与食蟹猴EpCam交叉反应。 凭借出色的结合亲和力和小尺 寸， 这些抗体可以适当 地用于生成双特异性 抗体， 例如也靶向免疫细胞的双特异性 抗体。 [0007]因此， 根据本 公开的一个实施方式， 提供了一种对人EpCam蛋白具有特异性的单域 抗体或其抗原结合片段， 其包含CDR1、 CDR2和CDR3， 其中所述CDR1、 CDR2和CDR3分别包含抗 体VHH1、 VHH2或VHH3中任何一种的CDR1、 CDR2和CDR3序列。 这些示例性抗体具有如SEQ  ID  NO: 1‑3所示的氨基酸序列。 [0008]在一些实施方式中， 所述CDR1、 CDR2和CDR3 分别包含SEQ  ID NO: 4‑6、 SEQ ID NO:  7‑9或SEQ ID NO: 10‑12的氨基酸序列。 [0009]在一些实施方式 中， 所述单域 抗体包含选自SEQ  ID NO:1‑3的氨基酸序列。 [0010]本公开还提供了一种双特异性抗体， 其包含本文公开的单域抗体或其抗原结合片 段和对不同于EpCam的抗原具有特异 性的第二抗体或抗原结合片段。 在一些实施方式中， 所 述抗原为人CD3 。说　明　书 1/16 页 3 CN 115109160 A 3