(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210642650.0 (22)申请日 2022.06.08 (71)申请人 南京涵台余 生物科技有限公司 地址 210000 江苏省南京市栖霞区栖霞街 道广月路3 3-33号 (72)发明人 洪子涵　戴伟亮　 (51)Int.Cl. A61K 47/68(2017.01) A61K 47/60(2017.01) A61K 35/15(2015.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) C12N 5/0784(2010.01) (54)发明名称 一种包括免疫细胞外泌体的药物组合物及 其应用 (57)摘要 本申请涉及一种包括免疫细胞外泌体的药 物组合物及其应用， 所述外泌体作为药物递送载 体， 与靶向Her2特异性抗体形成复合物， 该抗体 为人源化抗体， 可高特异性结合目标抗原， 提高 治疗靶向性， 还能够降低机体排斥反应， 改善生 物利用度； 所述外泌体为DC细胞外泌体Dex， DC细 胞经过肿瘤标志物和免疫因子诱导后， 可有效激 活DC细胞改善外泌体活性成分和抗肿瘤效能； Dex‑抗体复合物在体内、 体外实验中展现出协同 作用， 可同时改善治疗有效性和杀伤靶向性， 延 长实验动物生存期， 调节免疫蛋白表达水平。 权利要求书1页 说明书8页 序列表4页 附图3页 CN 114887075 A 2022.08.12 CN 114887075 A 1.一种用于治疗恶性肿瘤的药物组合物， 特征在于所述药物组合物包括携带靶向HER   2抗体的树突细胞外泌体， 所述外泌体通过磷脂聚乙二醇琥珀酰亚胺酯交联剂与靶向HER  2 抗体连接， 所述靶向HER  2抗体为人源化抗体， 所述抗体的轻链CDR区包括如SEQ  ID NO:1所 示的LCDR1、 SEQ  ID NO:2所示的LCDR2、 SEQ  ID NO:3所示的LCDR3； 重链CDR区， 包括如SEQ   ID NO:4所示的H CDR1、 SEQ ID NO:5所示的H CDR2、 SEQ ID NO:6所示的H CDR3。 2.根据权利要求1所述的药物组合物， 其特征在于， 所述抗体的轻链氨基酸序列如SEQ   ID NO:7所示。 3.根据权利要求1所述的药物组合物， 其特征在于， 所述抗体的重链氨基酸序列如SEQ   ID NO:8所示。 4.根据权利要求1所述的药物 组合物， 其特征在于， 所述树突细胞外泌体的制备步骤包 括： 使用AIM ‑V培养基在5％CO2在37℃培养箱中培养人DC细胞， 当细胞融合度达到90％后， 更换新鲜培养基， 在5％CO2在37℃培养箱中培养48h； 收集培养基， 采用梯度离心法除去培 养基中游离的活细胞、 死细胞、 细胞碎片； 所得溶液采用0.22 μm滤膜过滤， 除去大颗粒杂质； 然后在4℃下10000g超速离心60min， 弃去上清， 使用无菌PBS洗涤3次， 再4℃下10000g超速 离心90min， 收集沉淀获得树 突细胞外泌体颗粒。 5.根据权利要求4所述的药物 组合物， 其特征在于， 所述树突细胞外泌体的制备步骤包 括： 在DC细胞培养过程中加入诱导剂， 所述诱导剂包括癌胚抗原CEA、 糖类抗原CA125、 糖类 抗原CA19 ‑9、 甲胎蛋白、 I L‑12中的一种或多种。 6.根据权利要求5所述的药物 组合物， 其特征在于， 所述诱导剂包括癌胚抗原CEA、 糖类 抗原CA19 ‑9和IL‑12。 7.根据权利要求1所述的药物组合物， 其特征在于， 所述树突细胞外泌体与靶向HER  2 抗体的连接步骤包括： 将溶解于有机溶剂二甲基亚砜中的磷脂聚乙二醇琥珀酰亚胺酯与 HER 2人源化抗体按1:10 ‑10:1比例混合均匀， 在4℃无菌环境中搅拌混合30min， 然后将其 在4℃下反应过夜， 5000rpm离心10 ‑15min除去未反应的磷脂 聚乙二醇琥珀酰亚胺酯， 得到 磷脂聚乙二醇琥珀酰亚胺酯 ‑HER2人源化抗体复合物； 将树突细胞外泌体溶于无菌磷酸盐 缓冲溶液中得到树突细胞外泌体溶液， 将所述复合物与树突细胞外泌体按1:5 ‑5:1比例混 合均匀， 在4℃下轻轻吸打混合均匀， 37℃下反应2 ‑4h， 4500rpm离心5min得到携带靶向HER   2人源化抗体的树 突细胞外泌体。 8.权利要求1至7中任一项所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。 9.如权利要求8所述的应用， 所述肿瘤选自乳腺癌、 肺癌、 胃癌、 结直肠癌、 前列腺癌、 头 颈癌、 胰腺癌、 淋巴瘤、 白血病和/或骨髓瘤中的一种或几种。 10.如权利要求9所述的应用， 所述肿瘤选自肺癌。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114887075 A 2一种包括免疫细胞外泌体的药物组合物及其应用 技术领域： [0001]本发明属于肿瘤免疫治疗领域， 具体提供了一种包括免疫细胞外泌体的药物组合 物及其应用。 背景技术： [0002]癌症是严重危害人们生命健康的恶性疾病， 其中胃癌是癌症相关死亡的第三大原 因， 全球每年有超过100万人新诊断出胃癌， 2020年大约有47.8万新增胃癌病例以及大约 37.3万死亡病例， 新增和死亡胃癌患者总数居世界第一， 尽管过去5年全球发病率和死亡率 有所下降， 但仍 成为一个全球性的健康问题。 根据国际癌症研究机构的统计， 胃癌发病率随 着年龄的增长而增加， 胃癌在50岁以下的成年人中发病较少， 在55至8 0岁之间高发， 并且男 性胃癌的发病率是女性的2至3倍， 胃癌是男性第四大最常见的癌症类型， 也是女性第七大 最常见的癌症类型。 胃癌有两个主要的局部亚部位： 贲门胃癌(起源于与食管胃交界处相 邻 的胃区域)和非贲门胃癌(起源于胃的更远端区域)， 胃癌的发生受多种因素影响， 其中慢 性 幽门螺杆菌感染是胃癌的主要原因， 约占全球远端胃癌病例的89％； 其他原因包括吸烟、 酗 酒、 体力活动水平低和 辐射暴露、 有害物质暴露等 等。 [0003]随着对胃癌发病机制的研究不断深入， 已开发出多种胃癌治疗药物， 其中一线化 学治疗药物包括奥沙利铂、 卡培他滨、 伊立替康、 紫杉醇等等， 上述药物虽然能够有效抑制 肿瘤细胞生长， 诱导其凋亡， 但是由于早期化疗药物的靶向性较差， 对正常细胞或尤其是 处 于快速增殖阶段的正常细胞具有较大 的毒害作用， 使得化学治疗导致了严重的副反应， 影 响患者生活质量和治疗效果； 为提高治疗的靶向性， 研究人员开 发出多种分子靶向治疗剂， 包括VEGF ‑VEGFR抑制剂、 FGF R抑制剂、 EGFR酪氨酸激酶抑制剂、 HER ‑2抑制剂等， 使得胃癌的 治疗效果得到改善。 尽管如此， 胃癌的临床治疗效果仍不尽人意， 进展期胃癌预后仍然很 差， 中位生存期仅有7.5～12.0个月。 [0004]癌症免疫疗法是目前正在研究的新方法之一， 包括但不限于过继性T细胞疗法 (ACT)、 树突状细胞(DC)疫苗疗法、 自然杀伤(NK)细胞疗法、 嵌合抗原受体T细胞(CAR ‑T)疗 法以及免疫检查点抑制剂疗法等， 以PD ‑1抗体为例， 近3年全球范围内提交了数以百计的临 床试验申请， 受到了业内的广泛重视。 这类方法不使用对机体损伤较大的化学毒剂， 可以避 免严重化疗副反应， 提高患者 生活质量， 且能够达 到有效杀灭癌细胞的目的。 [0005]在众多免疫治疗手段中， DC细胞疗法引起了人们的重视。 DC细胞是一种先天免疫 细胞， 参与机体对肿 瘤和病毒的应激反应， DC细胞可作为抗原呈递细胞(APC)， 可通过主要 组织相容性复合分子I类(MHC  I)和II(MHC  II)分别促进 CD8+和CD4+T细胞的激活程度； DC细 胞还可调节细胞因子和趋化因子表达水平， 调节炎症和淋巴细胞的归巢。 DC还被广泛用于 药物递送载体， 如基于DC细胞开发抗肿瘤疫苗， Sipuleucel ‑T(Provenge  Dendreon   Corporation)是第一个DC疫苗疗法， 于2010年4月被美国食品和药物管理局(FDA)批准用于 治疗转移性前列腺癌， 随后数以百计的DC细胞相关临床试验在全球多个 国家和地区展开。 然而， 利用D C细胞来制备抗肿瘤 疫苗具有挑战性， 其分子组成极易 发生变化， 使得疫苗的质说　明　书 1/8 页 3 CN 114887075 A 3