(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210642703.9 (22)申请日 2022.06.08 (71)申请人 南京涵台余 生物科技有限公司 地址 210000 江苏省南京市栖霞区栖霞街 道广月路3 3-33号 (72)发明人 洪子涵　戴伟亮　 (51)Int.Cl. A61K 47/68(2017.01) A61K 47/60(2017.01) A61K 35/15(2015.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) C12N 5/0784(2010.01) C07K 16/32(2006.01) (54)发明名称 一种包括树突细胞外泌体的药物组合物及 其应用 (57)摘要 本申请涉及一种包括树突细胞外泌体的药 物组合物及其应用， 所述外泌体作为药物递送载 体， 与靶向Her2特异性抗体形成复合物， 该抗体 具有纳米抗体结构， 可高特异性结合目标抗原， 提高治疗靶向性， 且该类抗体结构更加简单， 便 于复合物的制备和纯化； 所述外泌体为DC细胞外 泌体Dex， DC细胞经过肿瘤标志物和免疫因子诱 导后， 可有效激活DC细胞改善外泌体活性成分和 抗肿瘤效能； Dex ‑抗体复合物在体内、 体外实验 中展现出协同作用， 可同时改善治疗有效性和杀 伤靶向性， 延长实验动物生存期， 调节免疫蛋白 表达水平。 权利要求书1页 说明书8页 序列表2页 附图3页 CN 114848838 A 2022.08.05 CN 114848838 A 1.一种用于治疗恶性肿瘤的药物组合物， 特征在于所述药物组合物包括携带靶向HER   2抗体的树突细胞外泌体， 所述外泌体通过磷脂聚乙二醇琥珀酰亚胺酯交联剂与靶向HER  2 抗体连接， 所述靶向HER  2抗体为纳米抗体， 所述纳米抗体包括如SEQ  ID NO:1所示的CDR1、 SEQ ID NO:2所示的CDR2和SEQ  ID NO:3所示的CDR3 。 2.根据权利要求1所述的药物组合物， 其特征在于， 所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ   ID NO:4所示。 3.根据权利要求1所述的药物 组合物， 其特征在于， 所述树突细胞外泌体的制备步骤包 括： 使用AIM ‑V培养基在5％CO2在37℃培养箱中培养人DC细胞， 当细胞融合度达到90％后， 更换新鲜培养基， 在5％CO2在37℃培养箱中培养48h； 收集培养基， 采用梯度离心法除去培 养基中游离的活细胞、 死细胞、 细胞碎片； 所得溶液采用0.22 μm滤膜过滤， 除去大颗粒杂质； 然后在4℃下10000g超速离心60min， 弃去上清， 使用无菌PBS洗涤3次， 再4℃下10000g超速 离心90min， 收集沉淀获得树 突细胞外泌体颗粒。 4.根据权利要求3所述的药物 组合物， 其特征在于， 所述树突细胞外泌体的制备步骤包 括： 在DC细胞培养过程中加入诱导剂， 所述诱导剂包括癌胚抗原CEA、 糖类抗原CA125、 IL ‑ 12、 IL‑10、 IFN‑γ、 TGF‑β 中的一种或多种。 5.根据权利要求4所述的药物 组合物， 其特征在于， 所述诱导剂包括癌胚抗原CEA、 糖类 抗原CA125和I L‑12。 6.根据权利要求1所述的药物组合物， 其特征在于， 所述树突细胞外泌体与靶向HER  2 抗体的连接步骤包括： 将溶解于有机溶剂二甲基亚砜中的磷脂聚乙二醇琥珀酰亚胺酯与 HER 2纳米抗体按1:10 ‑10:1比例混合均匀， 在4℃无菌环境中搅拌混合30min， 然后将其在4 ℃下反应过 夜， 5000rpm离心10 ‑15min除去未反应的磷脂聚乙二醇琥珀酰亚胺酯， 得到磷脂 聚乙二醇琥珀酰亚胺酯 ‑HER 2纳米抗体复合物； 将树突细胞外泌体溶于无菌磷酸盐缓冲溶 液中得到树突细胞外泌体溶液， 将所述复合物与树突细胞外泌体按1:5 ‑5:1比例混合均匀， 在4℃下轻轻吸打混合均匀， 37℃下反应2 ‑4h， 4500rpm离心5min得到携带靶向HER  2纳米抗 体的树突细胞外泌体。 7.权利要求1至 6中任一项所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。 8.如权利要求7所述的应用， 所述肿瘤选自乳腺癌、 肺癌、 胃癌、 结直肠癌、 前列腺癌、 头 颈癌、 胰腺癌、 淋巴瘤、 白血病和/或骨髓瘤中的一种或几种。 9.如权利要求8所述的应用， 所述肿瘤选自乳腺癌。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114848838 A 2一种包括树突细胞外泌体的药物组合物及其应用 技术领域： [0001]本发明属于肿瘤免疫治疗领域， 具体提供了一种包括树突细胞外泌体的药物组合 物及其应用。 背景技术： [0002]癌症是严重危害人们生命健康的恶性疾病， 其中乳腺癌是女性最常见的癌症， 占 每年新诊断癌症的十 分之一， 它是世界上女性癌症死亡的第二大常见原因。 目前常规检查、 影像学检查， 尤其是乳房X光检查和组织活检可用来诊断乳腺癌， 早期诊断对于提高患者生 存率至关重要。 但是乳腺癌早期常表现为出现乳房肿块， 乳房形状或大小的变化， 乳头溢 液， 以及乳腺痛等轻微症状， 难以引起足够的重视而延误治疗时机。 乳腺癌的发病原因比较 复杂， 据报道可能与以下因素相关， 包括： (1)年龄： 随着女性人口年龄的增 长， 乳腺癌的年 龄调整发病 率继续增加； (2)性别： 大多数乳腺癌发生于女性； (3)个人病史： 一个乳房的癌 症病史增加了对侧乳房第二个原发性癌症的可能性； (4)不良生活习惯或接触危险品： 吸 烟、 酗酒或其他有害化学品可增加患乳腺癌风险； (5)乳腺癌家族史和 遗传风险因素： 乳腺 癌患者的一级亲属患乳 腺癌的风险高出2至3倍， 有研究称BRCA1和BRCA2是导致乳 腺癌易感 性增加的两个最重要的基因； (6)生理风险因素： 女性的初潮 、 首次生产、 绝经等生理过程也 会增加患乳腺癌风险。 [0003]经过长期的临床实践研究， 逐渐总结出乳腺癌的两个基本治疗原则， 即减少局部 复发的机会和转移扩散的风险。 手术可实现对癌症的局部控制， 例如Halsted根治性乳房切 除术、 帕蒂改良根治术、 象限切除术等等， 但是手术治疗不仅增加了患者的经济负担和生活 负担， 还难以应对扩散性肿瘤。 化学疗法、 激素疗法和靶向疗法是用于乳 腺癌治疗的全身疗 法， 目前已经成为推荐的治疗方案， 如在6个月的周期内使用第一代 化疗方案(如环磷酰胺、 甲氨蝶呤和5 ‑氟尿嘧啶)在10至15年期间将 复发风险降低25％。 但是上述疗法仍难以有效 控制乳腺癌的发展， 提高患者生存周期和改善生活质量， 在临床上迫切需要靶向性 强、 副作 用低、 抗肿瘤效果明显的新型治疗手段。 [0004]癌症免疫疗法是目前正在研究的新方法之一， 包括但不限于过继性T细胞疗法 (ACT)、 树突状细胞(DC)疫苗疗法、 自然杀伤(NK)细胞疗法、 嵌合抗原受体T细胞(CAR ‑T)疗 法以及免疫检查点抑制剂疗法等， 这类方法不使用对机体损伤较大 的化学毒剂， 可以避免 严重化疗副反应， 提高患者 生活质量， 且能够达 到有效杀灭癌细胞的目的。 [0005]在众多免疫治疗手段中， DC细胞疗法引起了人们的重视。 DC细胞是一种先天免疫 细胞， 参与机体对肿 瘤和病毒的应激反应， DC细胞可作为抗原呈递细胞(APC)， 可通过主要 组织相容性复合分子I类(MHC  I)和II(MHC  II)分别促进 CD8+和CD4+T细胞的激活程度； DC细 胞还可调节细胞因子和趋化因子表达水平， 调节炎症和淋巴细胞的归巢。 DC还被广泛用于 药物递送载体， 如基于DC细胞开发抗肿瘤疫苗， Sipuleucel ‑T(Provenge  Dendreon   Corporation)是第一个DC疫苗疗法， 于2010年4月被美国食品和药物管理局(FDA)批准用于 治疗转移性前列腺癌， 随后数以百计的DC细胞相关临床试验在全球多个 国家和地区展开。说　明　书 1/8 页 3 CN 114848838 A 3