(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210645004.X (22)申请日 2022.06.08 (71)申请人 山东大学 地址 250100 山东省济南市历城区山大南 路27号 申请人 山东大学齐鲁医院 (72)发明人 曲仪庆　李建平　刘潇　殷运红　 张梦宇　 (74)专利代理 机构 北京睿智保诚专利代理事务 所(普通合伙) 11732 专利代理师 周新楣 (51)Int.Cl. C12N 15/87(2006.01) C12N 15/12(2006.01) A61K 45/00(2006.01)A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种敲减CCNA2基因的方法与敲减CCNA2基 因在制备治 疗肺腺癌药物中的应用 (57)摘要 本发明涉及一种敲减CCNA2 基因的方法与敲 减CCNA2基因在制备治疗肺腺癌药物中的应用， 属于生物医药技术领域。 本发明的敲减方法包括 如下步骤： (1)将细胞接种于无双抗培养基中培 养20～28h， 得到待转染的细胞； (2)将待转染的 细胞在CCNA2 基因干扰 液中培养4～ 6h后， 转入无 双抗培养基中继续培养18～44h。 按照本发明的 敲减方法敲减肺腺癌细胞中CCNA2基因， 可以抑 制肺腺癌细胞的增殖、 迁移、 侵袭能力， 为后期研 发治疗肺腺癌的药物提供依据。 权利要求书1页 说明书8页 附图13页 CN 114958922 A 2022.08.30 CN 114958922 A 1.一种敲减细胞中C CNA2基因的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)将细胞接种于无双抗培 养基中培 养20～28h， 得到待转染的细胞； (2)将待转染的细胞在CCNA2基因干扰液中培养4～6h后， 转入无双抗培养基中继续培 养18～44h。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述细胞为肺腺癌细胞。 3.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 所述无双抗培养基为含9～11vt％胎牛血 清的RPMI 1640培养基。 4.根据权利要求3所述的方法， 其特 征在于， 所述干扰液包括如下体积比的组分： Lipofectami ne 3000： siRNA： 优化 opti‑MEM培养基为4～6:4～6： 198 8～1992； 所述优化 opti‑MEM培养基为不含胎牛 血清的opti ‑MEM培养基。 5.敲减肺腺癌细胞中的C CNA2基因在制备治疗肺腺癌药物中的应用。 6.权利要求1～4任意一项所述的方法敲减肺腺癌细胞中CCNA2基因在制备治疗肺腺癌 药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114958922 A 2一种敲减C CNA2基因的方 法与敲减C CNA2基因在制备治疗肺腺 癌药物中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药技术领域， 尤其涉及一种敲减CCNA2基因的方法与敲减CCNA2 基因在制备治疗肺腺癌药物中的应用。 背景技术 [0002]肺癌是最常见的恶性肿瘤之一， 死亡率位居全球恶性肿瘤之首。 组织病理学上肺 癌分为非小细胞肺癌(non ‑small cell lung cancer， NSCLC)和小细胞肺癌(small  cell  lung cancer,SCLC)。 NSCLC约占肺癌的83％， 而肺腺癌(lu ng adenocar cinoma cell,LUAD) 是NSCLC最常见的病理类型。 LUAD的发生是多因素、 多个基因参与、 多阶段形成的过程。 随着 分子生物学技术的发展， 临床上可以根据 异常表达的分子来鉴别良、 恶性肿瘤。 研究LUAD中 分子的异常表达有利于为LUAD的分子病理诊断、 临床预后和治疗方案的选择提供新的依 据。 [0003]细胞周期蛋白A2(cyclinA2,CCNA2)是一种重要的细胞周期调节因子， 参与有丝分 裂的调控。 研究发现， CCNA2在乳腺癌、 卵巢癌和胃癌中均有高表达。 但是现有技术并没有探 究CCNA2在LUAD中的表达情况的方案 。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提供一种敲减CCNA2基因的方法与敲减CCNA2基因在制备治疗 肺腺癌药物中的应用。 [0005]为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技 术方案： [0006]本发明提供了一种敲减细胞中C CNA2基因的方法， 包括如下步骤： [0007](1)将细胞接种于无双抗培 养基中培 养20～28h， 得到待转染的细胞； [0008](2)将待转染的细胞在CCNA2基因干扰液中培养4～6h后， 转入无双抗培养基中继 续培养18～44h。 [0009]作为优选， 所述细胞为肺腺癌细胞。 [0010]作为优选， 所述无双抗培 养基为含9 ～11vt％胎牛 血清的RPMI  1640培养基。 [0011]作为优选， 所述干扰液包括如下体积比的组分： [0012]Lipofectami ne 3000： siRNA： 优化 opti‑MEM培养基为4～6:4～6： 198 8～1992； [0013]所述优化 opti‑MEM培养基为不含胎牛 血清的opti ‑MEM培养基。 [0014]本发明还提供了敲减肺腺癌细胞中的CCNA2基因在制备治疗肺腺癌药物中的应 用。 [0015]本发明还提供了所述的方法敲减肺腺癌细胞中CCNA2基因在制备治疗肺腺癌药物 中的应用。 [0016]本发明提供了一种敲减CCNA2基因的方法与敲减CCNA2基因在制备治疗肺腺癌药 物中的应用。说　明　书 1/8 页 3 CN 114958922 A 3