(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210647114.X (22)申请日 2022.06.08 (71)申请人 西南大学 地址 400715 重庆市北碚区天生路2号 (72)发明人 代方银　李政　童晓玲　程岚　 刘祖兰　成国涛　 (74)专利代理 机构 成都明涛智创专利代理有限 公司 51289 专利代理师 梁月钊 (51)Int.Cl. A61K 47/69(2017.01) A61K 47/54(2017.01) A61K 31/704(2006.01) A61K 45/06(2006.01) A61K 31/195(2006.01)A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种丝素纳米载药系统及其制备方法与应 用 (57)摘要 本发明公开了一种丝素纳米载药系统及其 制备方法与应用， 该纳米载药系统的制备方法如 下： (1)将蚕茧脱胶得到丝素纤维； (2)将丝素纤 维溶解、 透 析、 冻干， 得到冻干丝素蛋白； (3)将冻 干丝素蛋白溶于水并加入DOX获得DOX丝素蛋白 混合溶液； (4)将DOX丝 素蛋白混合溶液滴加至含 有缺氧诱导因子抑制剂的丙酮溶液中， 获得装 载 药物和缺氧诱导因子抑制剂的丝素纳米粒子； (5)将装载药物和缺氧诱导因子抑制剂的丝 素纳 米粒子进行叶酸靶向修饰得到丝素纳米载药颗 粒。 本发明制备的共载药FA靶向丝素纳米颗 粒可 以显著地增加化疗药物DOX在多药耐药乳腺癌细 胞的滞留量， 有效地抑制多药耐药乳腺癌细胞的 增殖， 克服阿霉素 单一给药时产生耐药的难题。 权利要求书1页 说明书7页 附图2页 CN 114949256 A 2022.08.30 CN 114949256 A 1.一种丝素纳米载药系统， 其特征在于， 包括载体、 药物及靶向分子， 其中， 所述载体为 丝素蛋白纳米颗粒， 所述药物为共载于丝素蛋白的DOX及缺氧诱导因子抑制剂， 所述靶向分 子为FA， 且FA接枝于装载DOX和缺氧诱导因子抑制剂的丝素蛋白纳米颗粒上形成丝素纳米 载药颗粒。 2.根据权利要求1所述的丝素纳米载药系统， 其特征在于， 所述丝素纳米载药颗粒的水 合粒径为10 0‑300nm。 3.根据权利要求2所述的丝素纳米载药系统， 其特征在于， 所述缺氧诱导因子抑制 剂为 PX478、 Oltipraz、 L W6、 Acriflavi ne中的一种或多种。 4.一种权利要求1 ‑3任意一项所述的丝素纳米载药系统 的制备方法， 其特征在于， 包括 如下步骤： 将蚕茧壳剪碎、 脱胶获得丝素纤维， 将丝素纤维溶解、 透析、 冻干后， 获得冻干丝素蛋 白； 将冻干丝素蛋白溶于水形成丝素蛋白溶液， 并加入DOX， 获得DOX与丝素蛋白的混合溶 液， 再将混合溶液滴加至含有缺氧诱导因子抑制剂的丙酮溶液中， 获得装载药物的丝素蛋 白纳米粒子； 将丝素蛋白纳米粒子进行 FA靶向修饰得到 丝素纳米载 药颗粒。 5.根据权利 要求4所述的制备方法， 其特征在于， 所述缺氧诱导因子抑制剂为PX478， 装 载药物的丝素蛋白纳米粒子为PX478 ‑DOX‑SFNPs， 丝素纳米载药颗粒为FA ‑PX478‑DOX‑ SFNPs。 6.根据权利要求4所述的制备方法， 其特征在于， 所述丝素纤维溶解于三元溶液后， 再 进行透析、 冻干处理， 其中所述三元溶液包括摩尔比为1:2:8的氯化钙、 乙醇、 水， 且1g丝素 纤维对应使用三元 溶液15‑25mL。 7.根据权利要求4所述的制备方法， 其特征在于， 所述冻干丝素蛋白溶水后的浓度为5 ‑ 20mg/mL,DOX加入丝 素蛋白溶液后的浓度为0.1 ‑0.5mg/mL， PX478与丙酮溶液混合后的浓度 为6.25‑50 μg/mL。 8.根据权利要求4所述的制备方法， 其特征在于， 所述FA接枝到丝素蛋白纳米粒子表面 的步骤如下： 将EDC与NHS溶于0.1mol/mL的MES溶液 中， 使EDC与NHS的浓度均为2 ‑15mg/mL， 随后加入 FA， 使FA的浓度为5 0‑100 μg/mL， 反应1 ‑3h， 得到一次溶 液； 加入NaOH调节一次溶 液的pH至7‑8， 得到二次溶 液； 将丝素蛋白纳米粒子加入二次溶液中， 使丝素蛋白纳米粒子的浓度为1 ‑4mg/mL， 在室 温条件下避光反应8 ‑12h， 水洗后得到FA ‑PX478‑DOX‑SFNPs。 9.权利要求1所述的丝素纳米载 药系统在治疗乳腺癌方面的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114949256 A 2一种丝素纳米载药系统及其制备方 法与应用 技术领域 [0001]本发明属于纳 米药物技术领域， 尤其是一种丝素纳 米载药系统及其制备方法与应 用。 背景技术 [0002]全球女性癌症患者中乳腺癌发病率位居第一， 严重威胁着女性的健康。 目前乳腺 癌治疗的方式主要有手术治疗、 放疗、 化疗。 其中， 化疗在乳腺癌治疗中一直占据重要地位， 化疗是通过化疗药物作用于肿瘤 细胞生长 繁殖的不同环 节上， 抑制或杀 死肿瘤细胞。 [0003]而蒽环类化疗药物则是乳腺癌化疗的基石， 盐酸阿霉素(Doxorubicin hydrochloride,DOX)就是一种经典而有效的恩环类化疗药物， 其性价比极高， 目前是乳腺 癌化疗的一线药物。 DOX通过嵌入DNA和抑制拓扑异构酶 Ⅰ和Ⅱ发挥其作用， 导致DNA损伤和 活性氧的形成， 激活半胱天冬酶， 使细胞凋亡。 然而随着阿霉素的大范围使用， 使肿瘤细胞 产生了多药耐药性。 [0004]其中， 多药耐药指癌细胞对一种抗肿瘤药物产生耐药性， 同时对其他非同类药物 也产生抗药性， 这是造成肿瘤化疗失败的主要原因之一， 这一问题 也严重影响着DOX的化疗 疗效， 因此， 肿瘤的多药耐药性是目前肿瘤治疗亟需解决的一大问题。 发明内容 [0005]本发明的目的在于： 提供一种丝素纳米载药系统， 以解决阿霉素在乳腺癌治疗过 程中的多药耐药问题。 [0006]本发明采用的技 术方案如下： [0007]一种丝素纳米载药系统， 包括载体、 药物及靶向分子， 其中， 所述载体为丝素蛋白 纳米颗粒， 所述药物为共载于丝素蛋白的DOX及缺氧诱导因子抑制剂， 所述靶向分子为FA (Folic acid,叶酸)， 且FA接枝于装 载DOX和缺氧诱导因子抑制剂的丝素蛋白纳米颗粒上形 成丝素纳米载 药颗粒。 [0008]更进一步地， 所述丝素纳米载 药颗粒的水合粒径为10 0‑300nm。 [0009]更进一步地， 所述缺氧诱导因子抑制剂为PX478、 Oltipraz、 LW6、 Acriflavine  中 的一种或多种。 [0010]上述丝素纳米载 药系统的制备 方法， 包括如下步骤： [0011]将蚕茧壳剪碎、 脱胶获得丝素 纤维， 将丝素纤维溶解、 透析、 冻干后， 获得冻干丝素 蛋白； [0012]将冻干丝素蛋白溶于水形成丝素蛋白溶液， 并加入DOX， 获得DOX与丝素蛋白的混 合溶液， 再将混合溶液滴加至含有缺氧诱导因子抑制剂的丙酮溶液中， 获得装载药物和缺 氧诱导因子抑制剂的丝素蛋白纳米粒子； [0013]将丝素蛋白纳米粒子进行 FA靶向修饰得到 丝素纳米载 药颗粒。 [0014]更进一步地， 所述缺氧诱导 因子抑制剂 为PX478， 装载药物的丝素蛋白纳 米粒子为说　明　书 1/7 页 3 CN 114949256 A 3