(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210637523.1 (22)申请日 2022.06.08 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114716553 A (43)申请公布日 2022.07.08 (73)专利权人 北京科诺信诚科技有限公司 地址 102206 北京市昌平区回龙观镇 立业 路6号院东侧一 号楼二层 (72)发明人 焦莎莎　王荣娟　王双　张畅　 毛冠凡　张锦超　 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C07K 16/00(2006.01) C07K 19/00(2006.01) C12N 15/13(2006.01)C12N 5/0783(2010.01) C12P 21/02(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (56)对比文件 CN 113543808 A,2021.10.2 2 WO 2021183839 A 2,2021.09.16 CN 112672760 A,2021.04.16 CN 10740 0166 A,2017.1 1.28 CN 111018985 A,2020.04.17 CN 111867614 A,2020.10.3 0 审查员 吕健 (54)发明名称 靶向人LILRB4的纳米抗体及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种靶向LILRB4的纳米抗体、 编码所述纳米抗体的核酸、 包含 所述核酸的表达 载体、 包含所述纳米抗体的药物组合物、 以及制 备药物的用途。 权利要求书1页 说明书10页 序列表14页 附图2页 CN 114716553 B 2022.08.23 CN 114716553 B 1.一种靶向LILRB4的纳米抗体， 其特征在于， 所述纳米抗体能够 特异性结合LILRB4， 且 所述纳米抗体中的VHH链的互补决定区CDR为SEQ  ID NO： 16所示的CDR1， SEQ  ID NO： 17所示 的CDR2， 和SEQ  ID NO： 18所示的CDR3 。 2.根据权利要求1所述的纳米抗体， 其特征在于， 所述纳米抗体是人源化的VHH或骆驼 源化的VH 。 3.根据权利 要求1所述的纳米抗体， 其特征在于， 所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ  ID  NO： 3所示。 4.一种融合 蛋白， 其特征在于， 其包括能够特异性结合LILRB4的功能结构域， 所述功能 结构域由权利要求1 ‑3任一项所述的靶向L ILRB4的纳米抗体构成。 5.一种抗LILRB4的抗体， 其特征在于， 所述抗体为传统抗体或其功能性片段， 所述抗体 的重链可变区由权利要求1 ‑3任一项所述的靶向L ILRB4的纳米抗体构成。 6.根据权利 要求5所述的抗LILRB4的抗体， 其特征在于， 所述功能性片段为所述传统抗 体的Fab、 Fab ’、 (Fab’)2、 Fv、 scFv或sdFv结构。 7.一种药物组合物， 其特征在于， 其包括权利 要求1‑3任一项所述的靶向LILRB4的纳米 抗体、 或权利要求4所述的融合蛋白， 或权利要求5或6所述的抗体， 以及药学上可接受的辅 料。 8.一种分离的核酸分子， 其特征在于， 其编码权利 要求1‑3任一项所述的靶向LILRB4纳 米抗体、 或编码权利要求 4所述的融合蛋白、 或编码权利要求5或6所述的抗体。 9.一种表达载体， 其特 征在于， 所述表达载体含有权利要求8所述的核酸分子 。 10.一种重组细胞， 其特 征在于， 所述重组细胞含有权利要求9所述的表达载体。 11.制备权利要求1 ‑3任一项所述的纳米抗体的方法， 其特征在于， 其包括： 培养权利要 求10所述的重组细胞， 从培 养产物中分离纯化获得 所述纳米抗体。 12.一种非诊断目的的激活T细胞的方法， 包括使T细胞与权利要求1 ‑3任一项所述的靶 向LILRB4纳米抗体、 权利要求4所述的融合蛋白、 权利要求5或6所述的抗体、 权利要求7所述 的组合物、 权利要求8所述的核酸分子、 权利要求9所述的载体、 或权利要求 10所述的重组细 胞接触， 所述接触包括在癌细胞存在下。 13.权利要求1 ‑3任一项所述的靶向LILRB4纳米抗体、 权利要求4所述的融合 蛋白、 权利 要求5或6所述的抗体、 权利要求7所述的组合物、 权利要求8所述的核酸分子、 权利要求9所 述的载体、 或权利要求10所述的重组细胞在制备药物中的用途， 所述药物用于预防、 治疗 和/或改善肿瘤。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114716553 B 2靶向人LILRB4的纳米抗体及其应用 技术领域 [0001]本发明属于抗体工程领域， 具体涉及一种用于诊断或治疗肿瘤的治疗性单域抗 体， 特别是 涉及一种靶向L ILRB4的纳米抗体、 其 衍生蛋白以及用于制备 药物的用途。 背景技术 [0002]纳米抗体是目前最小的抗体分子， 最初由比利时科学家Hamers在骆驼血液中发 现， 它是工程化抗体产品中备 受关注的一类。 纳米抗体主要优点： 一是体积是普通抗体的1/ 10， 因为体积小， 其在动物组织体内的穿透力强， 如， 可以通过人体的脑组织， 可以达到高密 度的肿瘤内部， 而普通抗体却不能， 这使 得可以通过纳米抗体来治疗某些肿瘤或脑部疾病； 二是抗原特异性好； 三是易于基因改造， 方便人工改造以获得对抗不同病原的抗体； 四是稳 定性高， 如， 纳米抗体在体内不被自然分解的时间比普通抗体长 （意味着药效时间更持久） ， 纳米抗体甚至能从人胃中通过而保持有效性。 [0003]LILRB4(又被称作ILT3,  LIR5, CD85K)是白细胞免疫球蛋白样受体 （LILRs/LI Rs） 的成员， 是一种在抗原呈递细胞 （APC） 上发现的免疫调节性跨膜蛋白。 LILRB4抑制APC活化 并通过T抑制细胞诱导免疫耐受性。 它已被证明通过诱导  T 细胞无反应性和  CD8+ T 抑制 细胞的分化来调节免疫反应， 并且可能对癌症建立免疫耐受发挥作用。 其主要在耐受性树 突细胞(D C)、 骨髓源性抑制细胞和M2巨噬细胞中表达， 少量表达在浆细胞表 面， 并不在造血 前体细胞或者干细胞表面表达。 LILRB4是单核细胞急性髓系白血病 （monocytic  AML） 的标 志分子， 其在mo nocytic AML细胞表面的高度表达 。 [0004]目 前 有 2 款 靶 向 L I L R B 4 的 抗 体 药 物 处 于 临 床 研 究 阶 段 ， 由 N G M   Biopharmaceuticals开发的NGM831目前处于临床一期， 适应症为胰腺癌、 乳腺癌、 胃癌、 非 小细胞肺癌、 子 宫颈癌、 宫颈内癌、 头颈部鳞状细胞癌、 膀胱尿路上皮癌、 结直肠癌、 食道癌、 卵巢癌、 肾细胞癌、 前列腺癌、 黑色素瘤、 间皮瘤、 胆管癌等； Immune ‑Onc Therapeutics开发 的IO‑202目前处于临床一期， 适应症为急性骨髓性白血病 、 骨髓单核细胞白血病等。 发明内容 [0005]现有技术中的ScFv、 Fab或全IgG类抗LILRB4抗体分子， 结构复杂、 分子较大， 虽然 能将活性分子连接到LILRB4上， 但影响活性分子的功能、 方法复杂、 负载效率也较低； 纳米 抗体分子较小、 易于操作， 但人源化程度低、 亲和力不高， 延长半衰期的性能有待进一步提 高。 [0006]针对上述现有技术的不足， 本发明提供一系列抗人LILRB4纳 米抗体序列及制备方 案。 提供的抗LILRB4纳米抗体能高亲和力结合人LILRB4， 并在细胞学模型上可以明确观察 到对T细胞的激活作用， 从而对肿瘤具有潜在的治疗价 值。 [0007]第一方面， 本 发明提供一种抗LILRB4的纳 米抗体， 根据本 发明的实施例， 所述纳米 抗体能够特异 性结合LIL RB4， 且所述纳米抗体中的VHH链的互补决定区CDR为选自下 组的一 种或多种：说　明　书 1/10 页 3 CN 114716553 B 3