(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210643718.7 (22)申请日 2022.06.09 (71)申请人 湖南农业大 学 地址 410128 湖南省长 沙市芙蓉区湖南农 业大学 (72)发明人 陆英　王欣　孙丹　 (74)专利代理 机构 长沙正奇专利事务所有限责 任公司 431 13 专利代理师 何为　袁颖华 (51)Int.Cl. C07C 51/42(2006.01) C07C 51/43(2006.01) C07C 51/47(2006.01) C07C 57/26(2006.01) C07C 59/82(2006.01)A61P 31/18(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 黑老虎果皮中三萜酸 化合物的制备方法 (57)摘要 一种黑老虎果皮中三萜酸化合物的制备方 法， 是取黑老虎果皮干燥， 粉碎， 用乙醇超声提 取， 滤液蒸发浓缩至膏状， 除去水溶部分， 得水不 溶浸膏； 再进行高速逆流色谱分离， 收集目标组 分 ， 得到纯 度大于95％的 化合物Seco ‑ neolcadsaranic  acid A、 Neokadsuranic  acid  A。 本方法简便、 快速、 重现性好， 适宜大量制备， 为三萜类化合物的进一步活性研究奠定物质基 础。 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 CN 115057770 A 2022.09.16 CN 115057770 A 1.一种黑老虎果皮中三萜酸 化合物的制备 方法， 其特 征在于， 该 方法步骤如下： A.取黑老虎果皮干燥， 粉碎， 用乙醇于室温下超声提取， 得粗提液， 将粗提液蒸发浓缩 至膏状， 再用蒸馏水超声提取除去水 溶部分后用甲醇溶解， 水浴挥干甲醇， 得 水不溶浸膏； B.选择高速逆流色谱的溶剂体系： 石油醚、 乙酸乙酯、 甲醇和蒸馏水按体积比9:3:6:1 混合； C.用高速逆流色谱溶剂体系的下相超声溶解步骤A所得的水不溶浸膏， 进行高速逆流 色谱分离， 分别收集出 峰时间110min ‑125min内的流分和175min ‑190min内的流分， 得到化 合物Seco ‑neolcadsaranic  acid A、 Neokadsuranic  acid A； 其中， 分离条件为： 流速2mL/ min， 主机转速85 0rpm， 温度20℃， 检测波长254 nm。 2.如权利要求1所述的黑老虎果皮中三萜酸化合物的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 A中的用乙醇于室温下超声提取是指按100g黑老虎果皮粉末加0.8L质量分数为60 ‑80％的 乙醇的量， 于黑老虎果皮粉中加入乙醇， 于室温下超声波提取55 ‑65min， 抽滤， 滤渣再用60 ‑ 80％质量分数的乙醇 室温下超声提取若干次， 每次25 ‑35min， 抽滤， 合并滤 液， 即得粗 提液。 3.如权利要求1所述的黑老虎果皮中三萜酸化合物的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 A中的用蒸馏水超声提取除去水溶部分是指于蒸发浓缩成的膏状物中加入蒸馏水， 室温下 超声提取， 抽滤， 滤渣再加入蒸馏水于室温下超声提取一次， 抽滤， 弃去滤液， 滤渣备用； 其 中， 每次提取时蒸馏水的加入量 为膏状物质量的10 ‑15倍。 4.如权利要求1所述的黑老虎果皮中三萜酸化合物的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 B中高速逆流色谱溶剂体系的上相为固定相， 下相为 流动相。 5.如权利要求1所述的黑老虎果皮中三萜酸化合物的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 A中黑老虎果皮干燥的温度为5 5‑65℃。 6.如权利要求1所述的黑老虎果皮中三萜酸化合物的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 A中水浴的温度为90 ‑100℃。 7.如权利要求1所述的黑老虎果皮中三萜酸化合物的制备方法， 其特征在于， 所述化合 物Seco‑neolcadsaran ic acid A的纯度为98％。 8.如权利要求1所述的黑老虎果皮中三萜酸化合物的制备方法， 其特征在于， 所述化合 物Neokadsuran ic acid A的纯度为95％。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115057770 A 2黑老虎果皮中 三萜酸化合物的制备方 法 技术领域 [0001]本发明涉及从植物中提取三萜酸化合物， 具体涉及一种从黑老虎果皮中分离制备 三萜酸化合物的方法。 背景技术 [0002]黑老虎(Kadsura  coccinea(Lem.)A.C.Smith)别名为冷饭团、 布福娜等， 是五味子 科南五味子属植物， 其根为一种常用中药， 性 温， 味辛、 微苦， 具有 行气止痛、 祛风活络、 散癖 消肿之功效， 在民间常用于治疗胃、 十二指肠溃疡、 慢性胃炎、 急性胃肠炎、 风湿性关节炎、 跌打肿痛、 痛经、 产后癖血腹痛等症。 [0003]近年来， 国内外研究者主要采用传统硅胶柱层析方法， 从五味子属植物中分离出 五百多个化学成分， 其中木脂素类约三百多个、 三萜类近二百个， 这些成分多具有抗HIV活 性、 抗血小板凝聚、 抗肿瘤、 抗乙型肝炎病毒等方面的活性， 因此， 从南 五味子属植物中寻找 和发现新结构以及新活性成为研究热点。 [0004]查阅文献可知， 目前从黑老虎植物中分离制 备三萜类化合物主要是从根中获得， 且均是采用反 复硅胶柱层析或硅胶柱层析联合制备液相方法， 该方法操作复杂、 重现性差、 耗时长， 化 合物有不可逆吸附等 缺点。 发明内容 [0005]本发明的目的是， 针对上述现有技术的不足， 提供一种采用高速逆流色谱从黑老 虎果皮中分离制备三萜酸 化合物的方法。 [0006]为达上述目的， 本发明采用的技术方案是： 一种黑老虎果皮中三萜酸化合物的制 备方法， 该方法步骤如下： [0007]A.取黑老虎果皮干燥， 粉碎， 用乙醇于室温下超声提取， 得粗提液， 将粗提液蒸发 浓缩至膏状， 再用蒸馏水超声提取除去 水溶部分后用甲醇溶解， 水浴挥干甲醇， 得水不溶浸 膏； [0008]上述所提的用乙醇于室温下超声提取是指按100g黑老虎果皮粉末加0.8L质量分 数为60‑80％的乙醇的量， 于黑老虎果皮粉中加 入乙醇， 于室温下超声波提取55 ‑65min， 抽 滤， 滤渣再用60‑80％％质量分数的乙醇室温下超声提取若干次， 每次提取25 ‑35min， 抽滤， 合并滤液， 即得粗提液。 其中， 滤渣超声提取时， 随着提取次数的增加每次乙醇的用量可适 当减少， 如第1次为0.4 L时， 下次可为0.1L。 [0009]上述所提的用蒸馏水超声提取除去水溶部分是指于蒸发浓缩成的膏状物中加入 蒸馏水， 室温下超声提取， 抽滤， 滤渣再加入蒸馏水于室温下超声提取一次， 抽滤， 弃去滤 液， 滤渣备用； 其中， 每次提取时蒸馏水的加入量 为膏状物质量的10 ‑15倍。 [0010]较佳的， 黑老虎果皮干燥的温度为5 5‑65℃； 甲醇挥干时的水浴温度为90 ‑100℃。 [0011]B.选择高速逆流色谱的溶剂体系： 石油醚、 乙酸乙酯、 甲醇和蒸馏水按体积比9:3: 6:1混合； 其中， 该 溶剂体系的上相为固定相， 下相为 流动相。说　明　书 1/4 页 3 CN 115057770 A 3