(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210650928.9 (22)申请日 2022.06.09 (71)申请人 四川普锐特 药业有限公司 地址 610000 四川省成 都市高新区高朋大 道15号 (72)发明人 侯曙光　李岭慧　谭立伟　王震宇　 孙歆　 (74)专利代理 机构 成都华风专利事务所(普通 合伙) 51223 专利代理师 杜朗宇 (51)Int.Cl. A61K 9/19(2006.01) A61K 47/42(2017.01) A61K 45/00(2006.01) A61K 31/12(2006.01)A61K 47/26(2006.01) A61P 25/00(2006.01) A61P 25/28(2006.01) A61P 35/00(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 30/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) (54)发明名称 一种以乳铁蛋白为载体的纳米组合物的制 备方法 (57)摘要 本发明公开了一种以乳铁蛋白为载体的纳 米组合物的制备方法， 包括如下内容： (1)将疏水 活性成分用有机溶剂溶解， 得到 溶剂相； (2)将含 乳铁蛋白的溶液作为反溶剂相， 与溶剂相混合制 备纳米粒， 溶剂相： 反溶剂相的体积比为1:8～ 16， 制备过程中混合溶液pH值为5～7， 分离出游 离的疏水活性成分后过滤、 冻干， 即得纳米组合 物； 其中， 疏水活性成分： 乳铁蛋白的投料比为1: 8～12。 本发明组合物LF ‑NP粒径均一、 载药能力 强、 稳定性好， 解决了乳铁蛋白现阶段制备过程 中， 使用具有较大毒性的交联剂而导致的安全性 低， 无法临床运用的瓶颈问题， 且经过系列筛选， 获得了可规模化稳定制备LF的工艺处方。 权利要求书1页 说明书11页 附图7页 CN 115025054 A 2022.09.09 CN 115025054 A 1.一种以乳 铁蛋白为载体的纳米组合物的制备 方法， 其特 征在于， 包括如下内容： (1)将疏水活性成分用有机溶剂溶解， 得到溶剂相； (2)将含乳铁蛋白的溶液作为反溶剂相， 与溶剂相混合制备纳米粒， 溶剂相： 反溶剂相 的体积比为1:8～16， 制备过程中混合溶液pH值为5～7， 分离出游离的疏水活性成分后过 滤、 冻干， 即得纳米组合物； 其中， 疏水活性成分： 乳 铁蛋白的投料比为1: 8～12。 2.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述疏水活性成分包括木犀草素、 姜 黄素、 依达拉奉、 喹硫平、 丁苯酞、 奥氮 平、 乙酰唑胺、 槲皮素， 厚朴酚中的一种或几种； 所述有机溶剂包括乙醇、 丙酮、 乙酸乙酯、 异丙醇、 石油醚中的任意 一种。 3.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述溶剂相： 反溶剂相的体积比为1: 12～1:16， 所述混合溶 液pH值为5～6， 疏 水活性成分： 乳 铁蛋白的投料比为1: 8～10； 进一步地， 所述溶剂相： 反溶剂相的体积比为1:16， 所述混合溶液pH值为6， 疏水活性成 分： 乳铁蛋白的投料比为1: 8； 或， 所述溶剂相： 反溶剂相的体积比为1:16， 所述混合溶液pH值为5， 疏水活性成分： 乳 铁蛋白的投料比为1:10 。 4.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述(2)中， 采用探针超声仪将反溶剂 相与溶剂相混合制备纳米粒， 所述探针超声仪的超声功率为45～180w， 振幅为2％～15％， 超声时间为0～5mi n。 5.根据权利要求4所述的制备方法， 其特征在于， 所述探针超声仪的超声功率为90w， 振 幅为10％， 超声时间为2mi n。 6.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述(2)中， 采用均质机将反溶剂相与 溶剂相混合制备纳米粒， 均质机搅拌速率 为： 500～1500rpm。 7.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述冻干使用的冻干保护剂包括乳 糖、 甘露醇、 海藻糖、 蔗糖、 木糖醇、 甘 氨酸、 肌醇中的一种。 8.根据权利要求7所述的制备方法， 其特征在于， 所述冻干保护剂为海藻糖， 用量为 0.5％～5％。 9.一种药物组合物， 包括权利要求1～8任一项制备方法所制备得到的纳米组合物以及 药学上可接受的载体或赋 形剂。 10.权利要求1～8任一项制备方法所制备得到的纳米组合物， 或权利要求9所述的药物 组合物在制备治疗和/或预防脑部疾病中的用途； 所述脑部疾病包括脑部神经损伤性疾病、 精神类疾病 、 癌症、 肿瘤。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115025054 A 2一种以乳铁 蛋白为载体的纳米组合物的制备方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 生物医用药物载体技术领域， 具体涉及一种以乳铁蛋白为载体的纳 米 组合物的制备 方法。 背景技术 [0002]阿尔茨海默症、 帕金森病及脑部肿瘤等脑部疾病已成为危害人类生命、 健康的一 类难治的病症。 目前临床上治疗脑部疾病使用的小分子细胞药物存在靶向性差、 时间短和 易产生耐药性等 问题。 纳米药物载体是指粒径在10～1000nm 的一类新型载体， 由于其粒径 比毛细血管通路小， 且具有降低药物毒副作用、 提高药物稳定性、 缓释控释药物和药物靶向 释放等优点， 逐渐引起了人们的高度重 视。 [0003]近年来， 纳米载药技术的发展为药物的脑靶向递送提供了一系列的研发策略， 如 基于纳米尺寸效应以提高疏水性药物分散性及渗透性的脂质体、 微乳液、 胶束等纳米制剂 和能够提高血脑屏障(BBB)透过效率的细胞穿膜肽(CPPs)、 基于受体介导的膜 转运蛋白(如 转铁蛋白和乳铁蛋白)等修饰技术均有效提高了药物在脑组织的富集。 其中， 作为人体内源 性物质的乳铁蛋白(Lactoferr in,LF)， 不仅可实现对于血脑屏障的高效透过及神经损伤部 位的主动靶向， 还因其来源广泛、 可结合基团多、 生物相容性高等优点， 具有成为药物脑部 递送候选载体的潜力。 [0004]LF是分子量约为80kDa的单体糖蛋白， 其等电点(Pl)约为8.0 ‑8.5。 LF作为纳米药 物载体治疗神经退行性疾病有多方面优势， 包括： 1)LF是生物相容性高且具有营养价值的 GRAS(普遍认 为是安全的)原料； 2)乳铁蛋白受体(LfR)在脑内皮细胞中高度 表达， 有助于药 物分子跨过BBB， 且LfR在与神经退行性疾病相关 的毛细血管和神经元中高度表达， 故LF可 以发挥脑靶向作用； 3)LF本身具有改善神经系统的功能， 大量学者在衰老和神经退化的大 脑中检测到较高水平的铁， LF作为铁转运蛋白， 能够通过与铁的螯合作用来减轻氧化应激 反应和改善 铁代谢来保护神经系统。 [0005]贾前生等公开了乳铁蛋白基姜黄素(Cur)纳米载体颗粒的制备方法： 采用超声浴 使姜黄素溶解在无水乙醇溶液中； 将一定体积的姜黄素溶液与5倍体积的乳铁蛋白 ‑Tris‑ HCl溶液混合， 静置12h后过滤， 冻干后得到姜黄素纳米载体颗粒(乳铁蛋白基姜黄素纳米载 体颗粒的制备及其对 大鼠抗疲劳能力的影 响[J].食品工业科技,2021,42(13):7.)。 该文 献 中的pH调节剂是使用Tris ‑HCl进行调节， Tris(三羟甲基氨基甲烷)是一种有毒、 有刺激性 的化学物质， 对 人体伤害较大； 该文 献方法得到的粒径太大， 粒径为593.8nm， 不利于利于穿 过紧密的脑组织间隙到 达作用部位， 且 包封率不理想， 仅为(6 3.57±2.43)％。 [0006]尽管目前关于乳铁蛋白纳米粒的制备方法已有报道， 但在制备工艺中存在大量使 用非药用交联剂(如戊二醛)、 有毒有机试剂的问题， 不适合直接作用于人体。 不仅如此， 制 备得到的纳米载药颗粒性状会受到反应原料、 反应条件等因素影响， 过于复杂的制备工艺 会常导致纳米粒制备结果重现性差， 使制剂后期的有效性评价产生差异， 这也是多数纳米 制剂无法规模化 生产应用的瓶颈问题。说　明　书 1/11 页 3 CN 115025054 A 3