(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210727352.1 (22)申请日 2022.06.10 (71)申请人 石河子大 学 地址 832000 新疆维吾尔自治区石河子市 北四路石河子大 学 (72)发明人 秦冬梅　杜梦鸽　陈卫军　蔡钢　 (51)Int.Cl. C07C 67/48(2006.01) C07C 69/33(2006.01) A61P 35/04(2006.01) A61P 35/02(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 从软紫草中提取异戊酰紫草素的方法及其 制备抗肝癌药物的用途 (57)摘要 本发明涉及一种从软紫草中提取异戊酰紫 草素的方法及其制备抗肝癌药物的用途； 一采取 将软紫草根进行粉碎， 然后用石油醚回流提取， 浓缩提取液合并得到浸膏； 二将步骤一得到的浸 膏经过正相和反相硅胶柱层析， 回收溶剂至干得 到纯度大于等于95％异戊酰紫草素纯品， 可用于 制备药物制剂； 异戊酰紫草素在制备抗肝癌药物 中的用途， 异戊酰紫草素可显著抑制人肝癌 HepG2、 鼠肝癌H22细胞的生长， 对人正常肝细胞 WRL68细胞毒 性小； 可诱导H epG2细胞的凋亡和坏 死， 抑制HepG2细胞增殖、 迁移和侵袭， 通过激活 PI3‑AKT信号通路， 促进 肝癌细胞凋亡； 异戊酰紫 草素对肿瘤细胞具有选择性细胞毒性， 具有较好 的抗肝癌应用前 景。 权利要求书1页 说明书5页 附图5页 CN 115160137 A 2022.10.11 CN 115160137 A 1.一种从软紫 草中提取异戊酰 紫草素的方法， 其特 征在于： 包括如下步骤： 第一步： 将获得的新疆软紫草根进行粉碎， 粉碎颗粒粒径0.5～1.5cm， 取1～4重量份的 软紫草根粉碎颗粒， 然后加入相当于所取的软紫草根粉碎颗粒重量4～5份的石油醚回流提 取， 使用高效旋转蒸发器浓缩提取液合并得到浸膏； 所述回流的温度为55～65℃， 所述提取 的时间为1.5～3 h， 提取液在35～45℃水浴锅中用高效旋转蒸发器旋转浓 缩； 第二步： 将步骤一得到的浸膏经过正相硅胶柱层析， 反相硅胶柱层析， 回收溶剂至干得 到其纯度大于等于95％异戊酰 紫草素纯品。 2.根据权利要求1所述的一种从软紫草中提取异戊酰紫草素的方法， 其特征在于： 所述 的正相硅胶柱采用的是200～300目或300～400目， 采用层析溶剂为石油醚 ‑乙酸乙酯40∶1 ～2 ∶ 1梯度洗脱， 反相硅胶柱层析 溶剂为二氯甲烷 ‑石油醚1∶ 6 洗脱。 3.一种异戊酰 紫草素制备抗 肝癌药物的用途； 其特 征在于： a、 异戊酰紫草素对人肝癌HepG2细胞、 鼠肝癌H22细胞、 人正常肝细 胞WRL68细胞毒性作 用有差异； b、 异戊酰 紫草素对HepG2细胞的增殖、 迁移和侵 袭有抑制作用； c、 异戊酰紫草素通过抑制p ‑AKT的表达， 上调Bad、 下调Bcl ‑2表达， 从而促进肿瘤细胞 凋亡， 发挥对肝癌防治作用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115160137 A 2从软紫草中提取异戊酰紫 草素的方 法及其制备抗肝癌药物的 用途 技术领域 [0001]本发明涉及医药技术领域， 具体涉及的是一种从我国新疆的软紫草中提取异戊酰 紫草素的方法及其制备抗 肝癌药物中的用途。 背景技术 [0002]关于肝脏肿瘤又称为肝癌是一种起源于肝脏 的癌症， 它是一种侵袭性肿瘤， 经常 发生在慢性肝病和肝硬化的情况下； 原发性肝癌是我国第四位的常见恶性肿瘤， 并且是全 球癌症相关死亡 的第三大原因， 对世界人民的健康造成了极大威胁。 临床上肝癌的治疗主 要包括手术治疗和非手术治疗， 其中只有5％～15％的肝癌早期患者适合手术切除， 但手术 后5年时复发率仍超过70％； 患者通常在晚期被诊断出患有肝癌， 治疗以西医手段为主， 长 期应用化疗药易产生耐药性、 毒性等不良反应； 越来越多的研究表明， 传统中药中的多种天 然化合物在抑制与癌症发展相关的机制 中发挥作用， 为了提高疗效和减轻化疗的不良反 应， 研发新的抗癌药物是必然的有效途径。 [0003]我国的新 疆紫草Arnebia  euchroma(Royle)Johnst.为紫草科多年生草本植物， 最 早记录于 《神农本草经》 。 近年来随着对紫草研究地不断深入， 发现了紫草的药理作用有抗 菌、 抗炎、 抗病毒、 抗肿瘤及免疫调节、 抗氧化等功效。 据报道紫草中的萘醌类成分紫草素可 以克服由P ‑gp， MRP1等耐药蛋白介导的肿瘤多药耐药和由抗凋亡因子Bcl ‑x L介导的凋亡 耐受， 具有治疗耐药肿瘤的优势(谢冰 芬， 冯公侃， 黄河， et  al.天然紫草萘醌类化合物及其 衍生物的抗瘤作用研究[J].中国药理学通报， 2006， 22(4)： 505 ‑7.)。 有研究表明紫草天然 化学成分甲基丙烯酰紫草素在体内外的抗肿瘤作用较好， 且呈明显的量效和时效关系 (Kong A， Rong Y， Chi C， et al.Signal  transduction  events elicited  by natural  products： Role  of MAPK and caspase pathways  in homeostatic  response  and  induction  of apoptosis[J].Archives  of Pharmacal  Research， 2000， 23(1)： 1 ‑16.)。 CN101721401  A公开了异戊酰紫草素在制备治疗前列腺癌药物中的应用， CN101194920  B公 开了紫草及其有效成分在制备治疗肿瘤干细胞 的药物中的应用， 目前为止， 还没有关于异 戊酰紫草素在制备抗 肝癌药物应用的研究。 发明内容 [0004]本发明的第一目的是提供一种从我国新疆软紫 草中提取异戊酰 紫草素的方法。 [0005]本发明的第二目的是异戊酰 紫草素制备抗 肝癌药物的用途。 [0006]本发明的第一目的是通过以下技 术方案实现的： [0007]本发明其特点在于： 包括如下步骤： [0008]第一步： 将获得的新疆软紫草根进行粉碎， 粉碎颗粒粒径0.5～1.5cm， 取1～4重量 份的软紫草根粉碎颗粒， 然后加入相当于所取的软紫草根粉碎颗粒重量4～5份的石油醚回 流提取， 高效旋转蒸发器浓缩提取液合并得到浸膏； 所述回流的温度为55～65℃， 所述提取说　明　书 1/5 页 3 CN 115160137 A 3