(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210659836.7 (22)申请日 2022.06.10 (71)申请人 浙江大学 地址 310012 浙江省杭州市西湖区余杭塘 路866号 (72)发明人 朱永良　汪睿　余琳　 (74)专利代理 机构 杭州杭诚专利事务所有限公 司 33109 专利代理师 何俊 (51)Int.Cl. C07K 14/765(2006.01) C07K 14/795(2006.01) C07K 14/79(2006.01) C07K 14/77(2006.01) C07K 14/47(2006.01)C07K 1/10(2006.01) C07K 16/44(2006.01) G01N 33/53(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种腺苷人工抗原、 腺苷抗体及其应用 (57)摘要 本发明涉及生物医药领域， 本发明公开了一 种腺苷人工抗原、 腺苷抗体及其应用。 本发明在 腺苷的4‑氨基上或在腺苷的9 ‑呋喃核糖基氧化 产生的甲醛基上通过酰胺反应或醛胺反应偶联 载体蛋白。 利用上述制备的具有免疫原性的腺苷 人工抗原免疫动物， 可以产生与腺苷特异性结合 的抗体。 其中公开了一种单克隆抗体的重链和轻 链可变区的CDR区氨基酸序列， 经验证该抗体与 其他腺苷类似物的交叉反应率低， 为后续有关腺 苷的检测和治疗提供了基础， 具有广阔的应用前 景。 权利要求书1页 说明书8页 附图2页 CN 115385999 A 2022.11.25 CN 115385999 A 1.一种腺苷人工抗原， 其特 征在于： 结构式如式(I)或式(I I)所示： 2.如权利要求1所述的腺苷人工抗原， 其特征在于： 结构式如式(I)所示的腺苷人工抗 原， 由在腺苷的4 ‑氨基上通过酰胺反应偶联 载体蛋白后获得。 3.如权利要求1所述的腺苷人工抗原， 其特征在于： 结构式如式(II)所示的腺苷人工抗 原， 由在腺苷的9 ‑呋喃核糖 基氧化产生的 甲醛基上通过 醛胺反应偶联 载体蛋白后获得。 4.如权利要求2或3所述的腺苷人工抗原， 其特征在于： 所述载体 蛋白为牛血清白蛋白、 人血清白蛋白、 血蓝蛋白、 乳 铁蛋白、 鸡卵白蛋白或猪甲状腺球蛋白。 5.如权利要求1 ‑4之一所述腺苷人工抗原在制备腺苷抗体中的应用。 6.一种腺苷抗体， 其特征在于： 所述腺苷抗体为单克隆抗体， 其重链可变区包含氨基酸 序列为SEQ  ID NO： 1所示的CDR1、 SEQ  ID NO： 2所示的CDR2和SEQ  ID NO： 3所示的CDR3； 其轻 链可变区包含氨基酸序列为SEQ  ID NO： 4所示的CDR1、 SEQ  ID NO： 5所示的CDR2和SEQ  ID  NO： 6所示的CDR3 。 7.如权利要求6所述腺苷抗体在制备用于中和 局部或全身游离腺苷的药物中的应用。 8.如权利要求7所述的应用， 其特征在于： 所述药物用于恶性肿瘤或微环境中腺苷浓度 异常升高的相关疾病。 9.如权利要求6所述腺苷抗体在制备用于测定样本腺苷水平的试剂或试剂盒中的应 用。 10.如权利要求9所述的应用， 其特征在于： 所述试剂或试剂盒为腺苷ELISA试剂盒、 腺 苷胶体金 试纸条或腺苷胶乳微球偶联物。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115385999 A 2一种腺苷人工抗原、 腺 苷抗体及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药 领域， 尤其涉及一种腺苷人工抗原、 腺苷抗体及其应用。 背景技术 [0002]腺苷是一种遍布人体细胞的内源性核苷。 作为维持稳态和调节免疫反应的重要信 号分子， 腺苷的生 成、 降解及运输受到机体的严格调控。 当组织出现炎症、 缺血、 低氧等病理 生理情况时， 多种机制可导致细胞内的ATP大量释放到细胞外， 经胞外核苷酸酶(以CD39和 CD73作用最为显著)的逐级去磷酸化， 引起腺苷浓度 急剧上升。 不同于ATP具有的免疫刺激 能力， 腺苷对免疫反应有显著的抑制作用， 以避免组织的过度 伤害。 高浓度的腺苷则主要通 过磷酸化形成一磷酸腺苷或通过腺苷脱氨酶形成肌苷而清除， 恢复并维持其在较低的正常 水平。 [0003]近年来腺苷信号通路在肿瘤免疫逃逸和免疫治疗耐受中的作用机制受到广泛研 究。 在肿瘤的发生发展过程中， 低氧诱导的HIF ‑1α 可促进细胞表面CD39和CD73的广泛高表 达， 进而使肿瘤细胞高代谢产生的大量ATP转化为重要的免疫抑制因子腺苷， 后者不仅可以 招募Treg、 MDSC、 CAF等免疫抑制细胞， 还可与A2AR受体直接结合来抑制NK细胞、 树突状细 胞、 细胞毒性T细胞等免疫细胞的活性， 形成有利于肿瘤生长的免疫抑制性肿瘤微环境 (Tumor microenviro nment， TM E)。 [0004]目前已有多种靶向CD39 ‑CD73‑A2AR通路的小 分子抑制剂或单克隆抗体， 但研究发 现另有CD38催化NAD+生成的ADPR/cADP R(环腺苷二磷酸核糖)可继续在CD203、 CD73等酶的 作用下生成腺苷， 因此获得直接靶向结合异常高水平腺苷的物质可能是一个改善免疫抑制 性TME的重要 策略。 抗体因其具有蛋白质的天然 特性和高度特异 性的优点， 在 靶向疾病治疗 中得到了广泛应用。 腺苷的分子量仅为267.24， 其相应抗体作为大分子物质(IgG相对分子 量约150,000)仅需微量体积就可完全阻断腺苷与受体的结合， 抑制腺苷的生物学活性。 同 时在检测方面， 目前国内外 分析腺苷主要采用气相色谱法、 气相色谱 ‑质谱法和液相色谱串 联质谱法等， 存在样品处理繁琐、 检测时间长、 仪器贵重等缺点， 相比之下， 操作简 便、 快速、 高灵敏度的免疫 学检测技术具有诸多优势。 因此制备出靶向腺苷的抗体具有广阔的应用前 景和临床转 化价值。 [0005]不同于大分子抗原物质， 腺苷的分子结构简单， 作为半抗原不足以激发充分的免 疫反应， 因而实现制备腺苷抗体这一目标的关键就在于设计并合成出合适的腺苷人工抗 原， 但是现有技 术中尚无有关于腺苷人工抗原及抗体的相关报道。 发明内容 [0006]为了解决上述技术问题， 本发明提供了一种腺苷人工抗原、 腺苷抗体及其应用。 本 发明在腺苷的4 ‑氨基上或在腺苷的9 ‑呋喃核糖基氧化产生的甲醛基上通过酰胺反应或醛 胺反应偶联载体蛋白。 利用上述制备 的具有免疫原性的腺苷人工抗原免疫动物， 可以产生 与腺苷特异性结合的抗体。 其中公开了一种 单克隆抗体的重链和轻链可变区的CDR区氨基说　明　书 1/8 页 3 CN 115385999 A 3