(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210664173.8 (22)申请日 2022.06.13 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114921551 A (43)申请公布日 2022.08.19 (73)专利权人 山东大学第二医院 地址 250033 山东省济南市天桥区北园大 街247号 (72)发明人 李佩蔚　赵小刚　周永甲　田忠献　 罗钧文　肖兆华　周洁　 (74)专利代理 机构 济南金迪知识产权代理有限 公司 37219 专利代理师 孙振家 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6841(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/113(2010.01) A61K 45/00(2006.01) A61K 31/7088(2006.01)A61P 35/00(2006.01) (56)对比文件 WO 201721 1999 A1,2017.12.14 CN 111269985 A,2020.0 6.12 CN 113151455 A,2021.07.23 CN 111778338 A,2020.10.16 CN 113957151 A,202 2.01.21 CN 112626221 A,2021.04.09 刘得恩.“环状RNA在食管鳞癌 患者中的表达 谱及预后价 值”. 《中国优秀硕士学位 论文全文数 据库医药卫 生科技辑》 .2021,(第2期), 姜运峰等.“PD-1单克隆抗体联合血 管内皮 抑素在Lew is肺癌小鼠的抗肿瘤效应 ”. 《山东大 学学报》 .2018,第5 6卷(第9期), Jordan P. Lewando wski.“The Firre locus produces a trans-acti ng RNA molecule that functi ons in hematopo iesis”. 《Nature Com munications》 .2019,第10卷 审查员 夏士博 (54)发明名称 人Circ-FIRRE在食管鳞癌中的应用及试剂 盒 (57)摘要 本发明涉及人Circ ‑FIRRE在食管鳞癌中的 应用及试剂盒。 本发明研究发现Circ ‑FIRRE在食 管鳞癌组织中较癌旁正常组织表达量明显升高， 且其高表达与食管鳞癌(ESCC)患者的临床分期、 淋巴结转移等密切相关。 本发明以Circ ‑FIRRE作 为食管鳞癌的生物标志物， 提出了Circ ‑FIRRE在 食管鳞癌中的用途， 尤其是在制备食 管鳞癌诊断 产品中的应用。 本发明研究表明， 较高的Circ ‑ FIRRE表达量提示所述对象患恶 性食管鳞癌的可 能性增加， 或者提示食管鳞癌预后不佳。 权利要求书1页 说明书11页 序列表2页 附图4页 CN 114921551 B 2022.11.18 CN 114921551 B 1.人Circ ‑FIRRE在制备食管鳞癌诊断、 预后评估和靶向治疗产品中的应用， 所述Circ ‑ FIRRE的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 2.如权利 要求1所述的应用， 其特征在于， 所述应用中Circ ‑FIRRE为食管鳞癌诊断和预 后评估的生物标志 物； 所述应用中Circ ‑FIRRE为食管鳞癌靶向治疗的作用靶点。 3.如权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述食管鳞癌诊断和预后评估产品包括特异 性识别Circ ‑FIRRE的物质； 所述特异性识别Circ ‑FIRRE的物质为特异性扩增Circ ‑FIRRE的引物对或特异性检测 Circ‑FIRRE的探针； 所述特异性扩增Circ ‑FIRRE的引物对为SEQ  ID NO.2所示的上游引物和SEQ  ID NO.3 所示的下游引物； 所述特异性检测Circ ‑FIRRE的探针序列如SEQ  ID NO.4所示。 4.如权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述食管鳞癌靶向治疗产品包括特异性敲低 Circ‑FIRRE表达的物质； 所述特异性 敲低Circ ‑FIRRE表达的物质为特异性干扰Circ ‑FIRRE表达的shRNA； 所述特异性干扰Circ ‑FIRRE表达的shRNA的序列如SEQ  ID NO.5~8所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921551 B 2人Circ‑FIRRE在食管鳞癌中的应用及 试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及人Circ ‑FIRRE在食管鳞癌中的应用及试剂盒， 属于生物医学技术领 域。 背景技术 [0002]我国是食管癌高发地区， 约占全球总 发病人数的一半以上。 主要有食管鳞状细胞 癌(ESCC)和食管腺癌(EAC)两种类型， 食管鳞状细胞癌是中国主要的病理类型， 占90％左 右， 其5年生存率仍然很低， 仅有15％ ‑25％。 食管癌还具有症状出现较晚、 内镜检查费用或 不适、 生物标志物的不敏感性和非特异 性的特点。 因此， 寻找并鉴定与ES CC相关的新型分子 标志物不仅有可能作为ESCC的潜在临床诊断指标， 亦可以此为靶点， 进一步深入研究ESCC 转移的分子 机制， 有效抑制ESC C进展。 2022 [0003]环状RNA(CircRNA)是一种新类型 的广泛存在且具有组织特异性、 较线性RNA更稳 定和肿瘤中高表达的内源性非编码RNA。 目前已被应用于多种疾病疫苗研发中。 机制上， 环 状RNA可以通过吸附内源性微小RNA， 即MicroRNA(miRNA)起到竞争性抑制的作用， 也可以与 RNA结合蛋白结合 发挥功能， 并且还 可以调控靶基因可变剪切和转录的过程。 大量研究证实 了CircRNA在多种疾病中发挥重要作用， 且与肿瘤的增殖、 侵袭和转移密切相关， 这表明 CircRNA有巨大的潜力成为新的疾病诊断标志物和 治疗靶点。 目前的研 究表明， CircRNA在 多种人类癌症中表达失调， 包括喉鳞状细胞癌， 胃癌， 肝癌， 结直肠癌， 胰腺癌， 非小细胞肺 癌等。 CircRNAs已被证明是一种潜在的新型生物标志物， 有望应用于多种癌症的早期检测 和筛查以及成为ESC C潜在的治疗 靶点。 [0004]组织芯片(t issue chip)， 也称组织微阵列(t issue microarrays)， 是生物芯片技 术的一个重要分支， 是将许多不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一载玻片上， 进 行同一指标的原 位组织学研究。 其最大优势在于， 芯片上的组织样本实验条件完全一致， 有 极好的质量控制。 节省时间、 节省试剂更 是显而易见的。 [0005]CircRNA FISH常用来定位CircRNA在细胞中的分布， 而将CircRNA  FISH(CircRNA 荧光原位杂交)， 作为检测食管鳞癌分期和预后的方法， 却还有诸多需要解决的难题。 目前 对临床组织 RNA的检测方法为提取新鲜组织核酸进 行RT‑qPCR的验证， 主要 是通过高通量二 代测序， 进 行线性化分析， 然而临床新鲜组织既难获得又难保存。 另外如何提高个体和组织 样本的操作重复性， 以及面对临床工作中大批量的样本检测如何减少时间和人力成本， 也 是本领域人员要面临的问题。 有效地解决这些问题才可以真正提高CircRNA在临床病理诊 断工作中由理论向实 践转变的可能性。 发明内容 [0006]针对现有技术中环状RNA在疾病诊断中的重要作用， 本发明提供了人Circ ‑FIRRE 在食管鳞癌中的应用及试剂盒。 [0007]本发明的技 术方案如下：说　明　书 1/11 页 3 CN 114921551 B 3