(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210665290.6 (22)申请日 2022.06.14 (71)申请人 中国医科 大学附属第一医院 地址 110001 辽宁省沈阳市和平区南京北 街155号 (72)发明人 景治涛　蒋炀　许锦坤　陈炼　 (74)专利代理 机构 沈阳亚泰专利商标代理有限 公司 21107 专利代理师 史力伏 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G01N 33/574(2006.01) A61K 48/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 人脑胶质瘤标志物hsa_circ_0000512及其 应用 (57)摘要 本发明属于生物医药技术领域， 具体涉及到 hsa_circ_0000512 （circRPPH1） 基因在胶质瘤诊 断、 治疗以及预后中的应用。 一种胶质瘤的生物 标志物， 所述标志物是hsa_circ_0000512 （circRPPH1）基因。 hsa_circ_0000512 （circRPPH1） 基因在胶质瘤诊断和预后判断相关 试剂盒中的 用途。 hsa_circ_0000512 （circRPPH1） 基因的抑制剂在制备治疗胶质瘤靶 向药物中的应用， 所述抑制剂能够特异抑制hsa_ circ_0000512 （circRPPH1） 基因的功 能。 实验证 明hsa_circ_0000512 （circRPPH1） 基因在体内胶 质瘤组织中的表达较正常脑组织中明显上调， 使 得hsa_circ_0000512 （circRPPH1） 基因成为肿瘤 辅助诊断标志物具备可行性。 本发 明为胶质瘤诊 治提供了新的理论依据和全新稳定性靶标， 也为 胶质瘤预后判断提供 策略。 权利要求书1页 说明书7页 序列表2页 附图4页 CN 114921552 A 2022.08.19 CN 114921552 A 1.hsa_circ_0000512基因表达水平的检测试剂在制备脑胶质瘤诊断筛查、 预后评估的 试剂盒中的应用。 2.根据权利要求1所述的hsa_circ_0000512基因表达水平的检测试剂在制备脑胶质瘤 诊断筛查、 预后评估的试剂盒中的应用， 其特征在于， 所述试剂盒中包含扩增hsa_circ_ 0000512基因的特异性引物、 与hsa_irc_0000512 基因核苷酸序列杂交的探针或干细胞干性 标志物蛋白抗体。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述扩增hsa_circ_0000512基因的特异性 引物序列如SEQ  ID NO.2和SEQ  ID NO.3所示； 所述 抗体为单 克隆抗体或多克隆抗体。 4.根据权利要求1所述的hsa_circ_0000512基因表达水平的检测试剂在制备脑胶质瘤 诊断筛查、 预后评估的试剂盒中的应用， 其特征在于， 所述的脑胶质瘤诊断筛查、 预后评估 的试剂盒以hsa_circ_0 000512基因作为标记 物。 5.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述的脑胶质瘤诊断筛查的试剂 盒是通过 western或定量PCR技术来检测组织中hsa_circ_0000512基因的表达水平， 所述的hsa_ circ_0000512基因表达的程度与脑胶质瘤发生 率呈正相关。 6.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述的脑胶质瘤预后评估试剂盒是通过 Western或定量PCR技术检测组织中hsa_circ_0000512基因 的表达水平， 所述的hsa_circ_ 0000512基因表达的程度与脑胶质瘤的预后生存期呈负相关。 7.hsa_circ_0000512基因表达水平的抑制剂在制备治疗胶质瘤的药物中的应用， 其特 征在于， 所述抑制剂能够抑制hsa_circ_0 000512基因表达水平。 8.根据权利要求7所述的hsa_circ_0000512基因表达水平的抑制剂在制备治疗胶质瘤 的药物中的应用， 其特征在于， 所述抑制剂的靶向序列如SEQ  ID NO:10‑SEQ ID NO:11所 示。 9.根据权利要求7所述的hsa_circ_0000512基因表达水平的抑制剂在制备治疗胶质瘤 的药物中的应用， 其特征在于， 所述抑制剂包括抑制hsa_circ_0000512基因表达的siRNA、 shRNA、 含有siRNA、 shRNA序列的表达载体和/或其他抑制剂化合物； 所述表达载体包括真核 表达载体， 所述真核细胞表达载体包括质粒表达载体或病毒表达载体。 10.如权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述抑制hsa_circ_0000512基因表达的 siRNA序列如SEQ  ID NO:4‑SEQ ID NO:7所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921552 A 2人脑胶质瘤标志物h sa_circ_0 000512及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技术领域， 具体涉及到胶质瘤环状RNA： hsa_circ_0000512及 其在胶质瘤的诊 治与预后中的应用。 背景技术 [0002]胶质瘤是最常见的人脑原发性恶性肿瘤， 患者常常伴随高死亡率以及较差的预 后。 当前普遍实施的胶质瘤治疗方式多为外科手术切除辅助术后放化疗的多模态治疗， 但 是经历此种治疗的患者很大比例上并未出现明显的预后生存期改善。 究其原因是恶性胶质 瘤本身的高度增殖特性和侵袭特性决定了这一不良预后， 肿瘤自身包含着介导肿瘤恶性生 物学行为的组织成分， 这些成分介导肿瘤细胞复制增殖， 逃避人体免疫系统杀伤以及药物 的广泛杀伤作用， 是肿瘤患者 不良预后的关键原因。 [0003]胶质瘤干细胞 （glioma  stem cells， GSCs） 是恶性胶质瘤中具有高度自我更新以 及多向分化能力的组织成分。 多项研究均 表明其与胶质瘤细胞的发生发展、 增殖侵袭、 抗凋 亡坏死以及耐药复发等过程有显著且复杂的关联。 因此， 靶向胶质瘤干细胞 的分子治疗能 够高效针对胶质瘤恶性的根源， 从而从根本上降低术后放化疗的耐受性， 并抑制复发， 最 终 有望实现胶质瘤治愈。 故探寻一种新的高效的胶质瘤特异性靶向标志物对于恶性胶质瘤的 精确诊断、 靶向精准治疗以及预后评估均发挥着重要的作用。 [0004]环状RNA （circular  RNA， circRNA） 是一种新型的通过反向剪接方式形成的环状 RNA， 相比较于线性RNA， 可耐受核酸酶的降解作用， 呈现出其 自身的稳定性。 不同的研究证 明circRNA在不同级别胶质瘤中存在显著表达差异， 尤其在正常组织与胶质瘤组织中比较 更为显著， 且参与胶质瘤的恶性进展和不良预后。 因此， circRNA在胶质瘤的诊断分子筛查、 分子诊断、 精准治疗等方面发挥其独特的作用。 发明内容 [0005]针对上述 问题， 本发明提供了一种胶质瘤标记物即circRNA  hsa_circ_0000512， 核酸序列： SEQ  ID NO:1， 及其在 恶性人脑胶质瘤的诊断、 治疗以及预后等方面的应用。 发 明 人首先基于高通量测序技术分析发现同正常组织相比较， 胶质瘤组织中的hsa_circ_ 0000512显著高表达， 且表达量随着WHO分级级别呈正相关。 同时， 高表达hsa_circ_0000512 与不良预后相对应。 因此， 本发明以患者来源胶质瘤干细胞为研究对象， 通过慢病毒载体对 hsa_circ_0000512基因进行沉默与过表达， 并进一步通过 实验发现hsa_circ_0000512的过 表达能够进一步促进胶质瘤干细胞的恶性表型 的产生， 反之， 沉默基因后则表现为抑制胶 质瘤干细胞的增殖、 侵袭表型， 此恶性表型通过胶质瘤干细胞相关干性表型得以体现 （例 如： SOX2/OCT4/Nesti n/CD133/Nanog） 。 [0006]为了明确hsa_circ_0000512在脑胶质瘤的诊断以及治疗中的作用以求达到精准 医学的要求， 本发明提供了如下技 术方案。 [0007]本发明提供了hsa_circ_0000512基因表达水平的检测试剂在制备脑胶质瘤诊断说　明　书 1/7 页 3 CN 114921552 A 3