(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210666047.6 (22)申请日 2022.06.14 (71)申请人 王艳春 地址 450003 河南省郑州市金 水区金水路1 号2001级 (72)发明人 王艳春　 (51)Int.Cl. A61K 47/69(2017.01) A61K 47/62(2017.01) A61K 31/585(2006.01) A61K 41/00(2020.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种转铁蛋白修饰的双靶向雷公藤甲素磁 性纳米颗粒的制备方法及其应用 (57)摘要 本发明涉及一种口服转铁蛋白修饰的双靶 向雷公藤甲素(Triptolide,Tri)磁性纳米颗粒 的制备方法及其应用。 该纳米颗粒是以氨基功能 化磁性纳米(MNP ‑NH2)作为磁性靶向配体， 转铁 蛋白(Tf)作为肿瘤靶向配体， 并与PEG ‑PLGA偶 联， 制备转铁蛋白修饰的Tri包封 的PEG‑PLGA磁 性纳米颗粒(Tf ‑MNP‑PEG‑PLGA‑Tri)。 该纳米颗 粒的平均粒径为137.39 ±3.72nm。 本发明所制备 的纳米颗粒， 不仅可以提高Tri的口服生物利用 度， 并具有肿瘤靶向作用(主动靶向和被动靶 向)， 从而 提高肿瘤对MNP的摄取， 增强Tri的抗肿 瘤活性。 权利要求书1页 说明书7页 附图4页 CN 115025244 A 2022.09.09 CN 115025244 A 1.一种转铁蛋白修饰的配体双靶向磁性纳米颗粒的制备方法， 其特征在于： 由Tri、 PEG‑PLGA、 转铁蛋白和氨基化磁性纳米颗粒组成。 2.根据权利要求1所述的转铁蛋白修饰的双靶向雷公藤甲素磁性纳米颗粒的制备方 法， 其特征在于所述纳米颗粒的粒径范围为10 0‑150nm。 3.根据权利要求1所述的转铁蛋白修饰的双靶向雷公藤甲素磁性纳米颗粒的制备方 法， 其特征在于， 所述方法包括如下步骤： (1)MNP‑NH2的制备： 采用共沉淀法合成NP ‑NH2。 将FeCl3和FeCl2溶解于蒸馏水中， 置 于三颈瓶中； 将混合溶液在氮气保护下加热至90℃， 10min后加入氨溶液沉淀Fe3+/Fe2+金属离子， 进 行磁分离后干燥可 得磁性纳米颗粒(MNPs)； 然后， 将3 ‑氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)作为胺化试剂， 通过硅化作用与Fe3O4纳米颗粒 表面结合， 形成MNP ‑NH2。 其具体步骤为： 将MNPs和APTES溶于80mL乙醇水中， 反应液在氮气 保护下， 40℃回流24h， 用热去离 子水和乙醇洗涤3次， 真空干燥； (2)MNP‑PEG‑PLGA‑Tri纳米粒子的制备： 采用W/O/W复合乳液溶剂蒸发法制备载药纳米颗粒。 将PEG ‑PLGA和Tri溶液二氯甲烷作 为油相， MNP ‑NH2溶液作为水相； 将水相滴加到油相中， 冰浴超声， 加入5％PV A溶液， 得到W/O/W双乳溶 液； 将双乳溶液倒入0.5 ％PVA水溶液中， 在室温下用高速分散器搅拌， 使二氯甲烷蒸发； 用 0.22 μm滤膜过 滤， 离心后， 冷冻干燥保存； (3)Tf‑MNP‑PEG‑PLGA‑Tri纳米粒子的制备： 将MNP‑PEG‑PLGA‑Tri纳米颗粒在水浴中孵育1h后， 加入1 ‑(3‑二甲氨基丙基) ‑3‑乙基 碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N ‑羟基琥珀酰 亚胺(NHS)， 搅拌混匀； 加入Tf， 37℃水浴3h， 透析(10kDa)12h， 除去游离Tri和Tf， 冷冻干燥， 即可得Tf ‑MNP‑ PEG‑PLGA‑Tri磁性复合纳米颗粒。 4.根据权利要求3所述的转铁蛋白修饰的双靶向雷公藤甲素磁性纳米颗粒的制备方 法， 其特征在于， 在M NP‑NH2的制备过程中， 加入FeC l3和FeCl2的摩尔比为1 ‑5： 1； 加入氨溶液 的体积为5 ‑15mL； MNPs和APTES的摩尔比为1 ‑3:1； 乙醇水的体积比为1 ‑5： 1。 5.根据权利要求3所述的转铁蛋白修饰的双靶向雷公藤甲素磁性纳米颗粒的制备方 法， 其特征在于， 在MNP ‑PEG‑PLGA‑Tri纳米粒子的制备过程中， 聚乙二醇 ‑聚乳酸聚乙醇酸 共聚物(PEG ‑PLGA)和Tri的质量比为5： 1 ‑10： 1； MNP ‑NH2溶液的浓度为5％ ‑10％。 6.根据权利要求3所述的转铁蛋白修饰的双靶向雷公藤甲素磁性纳米颗粒的制备方 法， 其特征在于， 在Tf ‑MNP‑PEG‑PLGA‑Tri纳米粒子的制备过程中， EDC和NHS的摩尔比为1： 1‑3： 1； Tf和MNP ‑PEG‑PLGA‑Tri的摩尔比为1 ‑4： 4。 7.一种如权利要求1 ‑6任一项所述的转铁 蛋白修饰的双靶向雷公藤甲素磁性纳米颗粒 的制备方法法制备的纳米颗粒的体内外抗肿瘤活性研究及其靶向抗肿瘤中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115025244 A 2一种转铁 蛋白修饰的双靶向雷公藤甲素磁性纳米颗粒的制备 方法及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及制药技术领域， 特别涉及一种转铁蛋白修饰的双靶向雷公藤甲素磁性 纳米颗粒的制备 方法及其应用。 背景技术 [0002]癌症是世界上主要的死亡原因之一， 严重危害人类的生存。 如 今， 肺癌已成为全球 癌症相关死亡的主要原因。 肺癌是一种病因复杂的恶性疾病， 可能涉及多种因素， 如遗传、 慢性感染、 环境污染、 生活方式等。 目前， 主要的治疗手段包括手术、 放疗、 靶向治疗和生物 免疫治疗。 化疗被认为是肺癌的主要治疗策略。 一般情况下， 由于化疗耐药和放疗疗效有 限， 癌症患者的预后较差。 除了上述治疗方案的挑战外， 紫杉醇、 阿霉素和 5‑氟尿嘧啶还存 在严重的全身副作用， 即心脏毒性、 神经毒性和肝毒性。 目前， 这些治疗方法受限于对肿瘤 组织的非选择性和对正常组织的高毒性。 因此， 识别靶向肺癌组织的新型药物传递系统尤 为重要。 [0003]PEG‑PLGA是一种 具有PEG亲水端和PLGA疏水端的两亲性嵌段聚合物， 常用来制备 纳米颗粒。 PEG和PLGA都是FDA批准的药物载体。 发现将PEG链引入到聚合物载体能逃脱间隙 内皮网络系统,增加药物的亲水性， 延长药物在体内的循环 时间， 提高载体的稳定性， 以及 实现被动靶向的目的。 与其他聚合物相比， PLGA具有良好的组织相容性和生物降解性。 因 此， PEG‑PLGA是制备MNP的理想载体材 料。 [0004]肿瘤的主动靶 向可通过转铁蛋白(Tf)来实现。 转铁蛋白受体(TfR)是一种跨膜糖 蛋白， 与转铁蛋白相互作用， 介导铁的吸收。 通过Tf和TfR介导与肿瘤细胞特异 性结合， 可用 于肿瘤靶向治疗。 因此， 通过Tf对MNP表 面进行修饰， 药物可靶向到肿瘤细胞， 从而提高肿瘤 对MNP的摄取， 增强药物的抗肿瘤活性。 [0005]Tri是一种广谱、 高抗肿瘤活性的环氧化二萜内酯， 对肺癌、 神经母细胞瘤和胆管 癌等具有很好的抑制效果。 现有研究进一步阐述了Tri的抗肿 瘤作用及机制， 证实了Tri在 干预细胞周期、 诱导肿瘤细胞凋亡中的确切作用。 然而， 由于其水溶性差、 体内生物利用度 低， 阻碍了Tr i在癌症治疗中的临床 应用。 为了解决这些挑战， Tr i已经被整合到几种纳米载 体中， 包括但不限于纳米脂质载体、 胶束、 脂质体、 纳米粒子和自微乳化给药系统。 Tri的这 些纳米配方极大地改善了药物的溶解度和生物利用度。 然而， 这些纳米载体在靶向肿瘤和 一些低载药载体的纳米颗粒聚集方面表现出不足， 尚未满足开发最小毒性载药纳米制剂 (如三载纳米颗粒)的需求。 此外， 开 发上述纳米颗粒的作者没有加入配体， 而配体有能力增 强纳米载体的靶向性。 基于上述缺点， 本研究试图探索改进Tri包封到纳米颗粒的可能性， 以克服其在临床上抗肿瘤活性的限制。 发明内容 [0006]针对前述背景技术， 本发明制备了一种Tf修饰的PEG ‑PLGA‑MNP‑Tri磁性纳米颗说　明　书 1/7 页 3 CN 115025244 A 3