(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210670706.3 (22)申请日 2022.06.14 (71)申请人 江苏省中 医药研究院 （江苏省中西 医结合医院） 地址 210028 江苏省南京市栖霞区红山路 十字街100号 (72)发明人 曹鹏　陈景　黄浩楹　曹萌　 (74)专利代理 机构 南京苏高专利商标事务所 (普通合伙) 32204 专利代理师 王宇婷 (51)Int.Cl. C12N 5/04(2006.01) A61K 9/50(2006.01) A61K 31/713(2006.01) A61K 47/46(2006.01)A61P 35/00(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) (54)发明名称 一种猕猴桃来源的植物纳米囊泡及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种猕猴桃来源的植物纳米 囊泡及其应用， 其通过以下步骤制得： (1)将猕猴 桃通过低速螺旋挤压榨出原浆； (2)将(1)中所得 原浆通过筛网过滤除杂， 收集滤液； (3)将(2)中 得到的滤液依次进行低速、 中速、 高速和超速离 心， 每次离心后弃去沉淀， 收集上清液进行下一 次离心， 其中最后一次离心， 收集沉淀； (4)将(3) 中所述最后一次离心收集的沉淀用缓冲液重悬 后超速离心， 收集沉淀； 所述沉淀用缓冲液再次 重悬后高速离心， 收集上清液； 所述上清液通过 滤膜即得猕猴桃来源的植物纳米囊泡。 所述猕猴 桃来源的植物纳米囊泡制备方法简单， 成本低， 产量大， 稳定性 好。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图8页 CN 114854667 A 2022.08.05 CN 114854667 A 1.一种猕猴桃来源的植物纳米囊泡， 其特 征在于， 通过以下步骤制得： (1)将猕猴桃通过低速 螺旋挤压榨出原浆； (2)将(1)中所 得原浆通过筛网过 滤除杂， 收集滤 液； (3)将(2)中得到的滤液依次进行低速、 中速、 高速和超速离心， 每次离心后弃去沉淀， 收集上清液进行 下一次离心， 其中最后一次离心， 收集 沉淀； (4)将(3)中所述最后一次离心收集的沉淀用缓冲液重悬后超速离心， 收集沉淀； 所述 沉淀用缓冲液再次重悬后高速离心， 收集上清液； 所述上清液通过滤膜即得猕猴桃来源的 植物纳米囊泡。 2.根据权利要求1所述的猕猴桃来源的植物纳米囊泡， 其特征在于， 步骤(1)中所述低 速螺旋挤压的转速为3 0～60转/分钟。 3.根据权利要求1所述的猕猴桃来源的植物纳米囊泡， 其特征在于， 步骤(2)中所述筛 网为200～2000目。 4.根据权利要求1所述的猕猴桃来源的植物纳米囊泡， 其特征在于， 步骤(3)中所述低 速离心的离心力为100～800 ×g， 离心时间为5～10分钟； 所述中速离心的离心力为1000～ 8000×g， 离心时间为10～30分钟； 所述高速离心的离心力 为8000～12000 ×g， 离心时间为 30～60分钟； 所述超速 离心的离心力为10 0000～200000×g， 离心时间为6 0～120分钟。 5.根据权利要求4所述的猕猴桃来源的植物纳米囊泡， 其特征在于， 所述低速离心的离 心力为200～500 ×g； 所述中速离心的离心力 为2000～5000 ×g； 所述高速离心的离心力 为 100000～12000×g； 所述超速 离心的离心力为10 0000～120000×g。 6.根据权利要求1所述的猕猴桃来源的植物纳米囊泡， 其特征在于， 步骤(4)中， 所述缓 冲液为磷酸盐缓冲液， 所述缓冲液的pH范围为pH7.2～7.4； 所述超速离心的离心力为 100000～2 00000×g， 离心时间为60～120分钟； 所述高速离心的离心力为8000～12000 ×g， 离心时间为3 0～60分钟。 7.根据权利要求1所述的猕猴桃来源的植物纳米囊泡， 其特征在于， 所述滤膜的孔径为 0.45 μm。 8.权利要求1所述的猕猴桃来源的植物纳米囊泡在制备 药物载体中的应用。 9.权利要求1所述的猕猴桃来源的植物纳米囊泡在制备抗肿瘤药物中的应用。 10.一种纳米囊泡RNA纳米颗粒复合物， 其特征在于， 由权利要求1所述的猕猴桃来源的 植物纳米囊泡作为载体， 包裹siRNA。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114854667 A 2一种猕猴桃来源的植物纳米囊泡及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及一种纳米囊泡， 具体涉及一种猕猴桃来源的植物纳米囊泡及其应用。 背景技术 [0002]肺癌是全世界最常见的癌 症死亡原因， 估计每年有160万人死亡。 大约85％的患者 有一组组织学亚型 统称为非小细胞肺癌(NS CLC)， 其中肺腺癌和肺鳞癌是最常见的亚型。 在 过去的二十年里， 非小细胞肺癌的治疗取得了重要进展， 加深了我们对疾病生物学和肿瘤 进展机制的了解， 促进了早期发现和多模式护理。 小分子酪氨酸激酶抑制剂的使用和免疫 治疗在选定的患者中带来了前所未有的生存益处。 然而， NSCLC的总体治愈率和存活率仍然 很低， 特别是在转移性疾病中。 因此， 需要继续研究新药和联合疗法， 以便将临床益处扩大 到更广泛的患者群 体， 并改善非小细胞肺癌的预后。 [0003]目前药物载体是一个高度热议的话题， 其他的药物载体有脂质载体、 聚合物载体、 病毒型载体、 无机分子载体等等。 但是这些载体有热动稳定性低、 定位靶向能力弱、 非靶向 的体内传递引起的高毒性、 被机体生物代谢率低等问题。 尤其是非靶向的体内传递大大局 限了这些载体在新一代 抗肿瘤药物中的应用。 细胞外囊泡是由细胞分泌的含有RNA/DNA， 脂 质和蛋白质等的小泡。 几乎所有的细胞都能够产生囊泡， 因此囊泡来源广泛， 能够进 行大量 生产。 囊泡是天然的细胞间成分交流和传递的载体， 其生物安全性高、 免疫原性低、 容易被 细胞吸收， 同时， 所运输的药物在细胞内能够有效释放， 不易在细胞内被降解。 其众多特点 使之成为一个非常有应用价值的药物载体。 而且植物来源的囊泡比动物来源的囊泡更加具 有上述优势。 [0004]猕猴桃， 为猕猴桃科猕猴桃属植物猕猴桃Act inidia chinensis  Planch.的果实， 是一款深受人民喜爱的水果， 但很少人知道它还是一味药食同源的中药。 其药性较为平和， 具有解热， 止渴， 健胃， 通淋之功效， 适合大多 数人使用。 现代药 理研究表明猕猴桃具有抗肿 瘤、 降糖降脂、 抗氧化、 免疫调节等作用。 发明内容 [0005]发明目的： 本 发明的目的在于提供制备天然来源、 安全的药物递送载体。 猕猴桃来 源的植物纳米囊泡是一种新型安全的药物载体， 替代传统具有 毒性的脂质体药物载体。 [0006]技术方案： 本发明所述的猕猴桃来源的植物纳米囊泡， 通过以下步骤制得： [0007](1)将猕猴桃通过低速 螺旋挤压榨出原浆； [0008](2)将(1)中所 得原浆通过筛网过 滤除杂， 收集滤 液； [0009](3)将(2)中得到的滤液依次进行低速、 中速、 高速和超速离心， 每次离心后弃去沉 淀， 收集上清液进行 下一次离心， 其中最后一次离心， 收集 沉淀； [0010](4)将(3)中所述最后一次离心收集 的沉淀用缓冲液重悬后超速离心， 收集沉淀； 所述沉淀用缓冲液再次重悬后高速离心， 收集上清液； 所述上清液通过滤膜即得猕猴桃来 源的植物纳米囊泡。说　明　书 1/5 页 3 CN 114854667 A 3