(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210667991.3 (22)申请日 2022.06.14 (71)申请人 南通大学 地址 226001 江苏省南 通市崇川区啬园路9 号 (72)发明人 陈添兴　 (74)专利代理 机构 北京科家知识产权代理事务 所(普通合伙) 11427 专利代理师 曹振中 (51)Int.Cl. A61K 31/704(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 1/16(2006.01) C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 Erinacine A在制备治疗肝癌的生物药物制 剂中的应用 (57)摘要 本发明提供Erinacine  A在制备治疗 肝癌的 生物药物制剂中的应用， 涉及生物制药技术领 域， 所述生物药物制剂包括注射剂、 输液剂或其 他药物制剂。 Erinacine  A可以显著抑制肝癌细 胞的干性， 从而抑制肝癌干细胞的成瘤。 由此可 见， Erinacine  A有望开发成为抑制肝癌细胞干 性的制剂， 有望成为用于治疗肝癌的生物药物制 剂。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 115006415 A 2022.09.06 CN 115006415 A 1.Erinacine A在制备治疗肝癌的生物药物制剂中的应用。 2.根据权利要求1所述的Erin acine A在制备治疗肝癌的生物药物制剂中的应用， 其特 征在于： 所述 生物药物制剂包括注射剂、 输液剂、 口服液。 3.一种治疗肝癌的生物药物制剂， 其特 征在于： 包 含Erinacine A。 4.一种Eri nacine A抑制肝癌细胞干性的验证方法， 其特 征在于： 包 含以下步骤： S1： 分离肝癌干细胞； S2： Erinacine  A抑制肝癌细胞干性验证： 使用含有Erinacine  A的肿瘤干细胞培养基 继续孵育Normal Huh‑7或Huh‑7 stem cells； S3： 荧光定量PCR 实验检测肝癌细胞的干性标志 物的表达 。 5.根据权利要求4所述的Erinacine  A抑制肝癌细胞干性的验证方法， 其特征在于： 所 述S3中， 在使用含有Erinacine  A的肿瘤干细胞培养基继续孵育Normal  Huh‑7或Huh‑7  stem cells的第10天收集细胞样本， 并采用采用Trizol法提取样本的总mRNA， 经过反转录 得到cDNA； 使用C YBR Green试剂盒， 在荧 光定量PCR仪上进行荧 光定量PCR分析。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115006415 A 2Erinacine A在制备治疗肝癌的生物药物制剂中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物制药技术领域， 尤其涉及Erinacine  A在制备治疗肝癌的生物药 物制剂中的应用。 背景技术 [0002]肝癌是病因复杂且是我国位居第二的恶性肿瘤。 然而， 肝癌细胞的干性已经成为 妨碍治疗效果的重要因素。 所以， 研究开 发针对肝癌细胞干性的制剂、 药物具有重要的应用 价值。 发明内容 [0003]本发明的目的是为了研究开发针对肝癌细胞干性的制剂、 药物。 [0004]为了实现上述目的， 本发明采用了如下技 术方案： Erinacine A在制备治疗肝癌的生物药物制剂中的应用。 [0005]优选的， 所述 生物药物制剂包括注射剂、 输液剂、 口服液。 [0006]一种治疗肝癌的生物药物制剂， 包括Eri nacine A。 [0007]一种Erinacine A抑制肝癌细胞干性的验证方法， 包 含以下步骤： S1： 分离肝癌干细胞； S2： Erinacine  A抑制肝癌细胞干性验证： 使用含有Erinacine  A的肿瘤干细胞培 养基继续孵 育Normal Huh‑7或Huh‑7 stem cells； S3： 荧光定量PCR 实验检测肝癌细胞的干性标志 物的表达 。 [0008]优选的， 所述S3中， 在使用含有Erinacine  A的肿瘤干细胞培养基继续孵育Normal   Huh‑7或Huh‑7 stem cells的第10天收集细胞样本， 并采用Trizol法提取样本的总mRNA， 经 过反转录得到 cDNA； 使用C YBR Green试剂盒， 在荧 光定量PCR仪上进行荧 光定量PCR分析。 [0009]综上所述， Erinacine  A可以显著抑制肝癌细胞的干性， 从而抑制肝癌干细胞的成 瘤。 由此可见， Erinacine  A有望开发成为抑制肝癌细胞干性的制剂， 有望成为用于治疗肝 癌的生物药物制剂。 附图说明 [0010]图1： Erinacine  A抑制肝癌细胞的干性。 将肝癌细胞Huh ‑7以及肝癌干细胞 （Huh ‑7  stem cells） 种于六孔板， 每孔2 ×105个细胞。 （A） 显微镜观察肿瘤细胞和肿瘤干细胞的成 球实验 （目镜10倍数， 物镜20倍） ； （B） 荧光定量PCR检测肝癌细胞的干性标志基因的表达。*p < 0.05与Normal  Huh‑7+Placebo比，#p< 0.05与Huh ‑7 stem cells+Placebo。 Normal  Huh‑ 7， 普通Huh ‑7细胞； Huh ‑7 stem cells， Huh ‑7诱导形成的肝癌干细 胞； Placebo， Erin acine  A的对照组； SOX2、 CD3 3和CD133， 肝癌细胞的干性标志基因。 [0011]图2： Erinacine  A抑制肝癌干细胞的成瘤。 接种肿瘤细胞 （Normal  Huh‑7） 和肿瘤 干细胞 （Huh ‑7 stem cells） 于裸鼠皮下。 在10天之后， 持续瘤内给药Erinacine  A 15天， 即说　明　书 1/3 页 3 CN 115006415 A 3