(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210705015.2 (22)申请日 2022.06.21 (71)申请人 华盛农业 集团股份有限公司 地址 262501 山东省潍坊市青州市南环路 6699号 (72)发明人 袁晓伟　孙西苹　李兴盛　 (74)专利代理 机构 潍坊正信致远知识产权代理 有限公司 3725 5 专利代理师 刘德林 (51)Int.Cl. G01N 21/31(2006.01) G01N 21/01(2006.01) (54)发明名称 一种植物花青素的批量检测方法 (57)摘要 本发明属于检测分析技术领域， 公开了一种 植物花青素的批量检测方法,将待检测样品匀浆 破碎,加入提取液超声波振荡得到花青素粗提 液,将花青素粗提液分别加入到pH1.0缓冲液和 pH4.5缓冲液中于黑暗中静置2h， 然后分别移取 静置后的液体到酶标板上， 用酶标仪在530nm波 长下测定吸光度， 并根据吸光度计算花青素的含 量。 本发明测定方法简单、 高效、 实用， 准确度高， 能实现批量 性检测。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 115096833 A 2022.09.23 CN 115096833 A 1.一种植物花青素的批量检测方法， 其特 征在于： 包括以下步骤： a.将待检测样品非食用部分去除， 将剩余部分在匀浆破碎仪上破碎， 混匀； b.称取5g处理后样品， 加入提取液， 用容量瓶定容至100ml， 摇匀， 置于60～70℃下超声 波振荡40mi n， 得到花青素粗 提液； c.取5ml花青素粗提液， 8000rpm离心5min， 取上清2 ml分别加入盛有 10ml pH1.0缓冲液 和10mlpH4.5缓冲液的容器中， 混匀， 置 于黑暗中静置2h； d.对酶标板96个微孔进行编号， 并分别移取200 μL待测试溶液于酶标板的微孔中， 以蒸 馏水作对照； 将不同样品、 同个样品不同pH值缓冲液下的样品移取到相应的微孔中， 然后用 酶标仪测定 530nm波长下的吸光度； e.结果计算： 样品中花青素的含量按以下公式进行计算： X＝(AV/ εLWt)×103×MW×DF 公式中： X—试样中花青素含量， 单位 为mg/g； A—吸光度， A＝(A5 30nm)pH1.0 ‑(A530nm)pH4.5； V—粗提液的体积， 单位 为L； ε—矢车菊花素 ‑3‑葡萄糖苷的消光系数， 数值 为26900， 单位为L/(mol·cm)； L—光程， 数值为1， 单位 为cm； Wt—试样的重量， 单位 为g； MW—矢车菊花素 ‑3‑葡萄糖苷的分子量， 数值 为449.2， 单位 为g/mol； DF—稀释因子 。 2.如权利要求1所述的植物花青素的批量检测方法， 其特征在于： 所述步骤b中提取液 为： 取850ml无水乙醇， 加入18.7ml的浓盐酸， 补水定容至1L配制而成的提取 液。 3.如权利 要求1所述的植物花青素的批量检测方法， 其特征在于： 所述步骤c中pH1.0缓 冲液为： 称取1.86g氯化钾于500ml蒸馏水中溶解， 加入6.4ml的浓盐酸， 混匀， 用盐酸调pH值 为1.0， 补水定容至1L， 配制而成。 4.如权利 要求1所述的植物花青素的批量检测方法， 其特征在于： 所述步骤c中pH4.5缓 冲液为： 称取32.8g无水乙酸钠于500ml蒸馏水中溶解， 加入19.9ml的浓盐酸， 混匀， 用盐酸 调pH值为4.5， 补水定容至1L， 配制而成。 5.如权利要求1所述的植物花青素的批量检测方法， 其特征在于： 所述步骤e中DF为步 骤c中花青素粗 提液的稀释倍数。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115096833 A 2一种植物花青素的批量 检测方法 技术领域 [0001]本发明属于检测分析技 术领域， 具体涉及一种植物花青素的批量检测方法。 背景技术 [0002]花青素(anthocyanidins)， 又称花色素， 是自然界一类广泛存在于植物中的水溶 性天然色素。 花青素属于生物类黄酮物质， 最主要的生理活性功 能是自由基清除能力和抗 氧化能力。 花青素是当今人类发现最有效的抗氧化剂， 也是最强效的自由基清除剂， 花青素 的抗氧化性能比VE高50倍， 比VC高20倍。 随着人们的生活节 奏越来越 快， 亚健康人群比例不 断升高， 消费市场对富含花青素 的功能性蔬菜需求越来越大， 其花青素含量的测定是评价 功能性植物的重要指标。 [0003]目前对花青素的检测方法主要有分光光度法和高效液相色谱法。 利用HP LC对花青 素进行定性定量的研究也仅限于原 花青素单体及低聚体， 且对实验条件及实验人员要求较 高， 检测成本高， 检测效率低。 目前分光光度计法操作相对简单、 成本低廉， 但 其无法进 行批 量检测， 依然解决不了大批量的检测的难题。 发明内容 [0004]本发明所要解决的技术问题是： 提供一种植物花青素的批量检测方法， 克服了现 有技术测定方法步骤繁琐、 测定效率不高的缺陷， 检测方法简单， 准确度高， 并能进行批量 检测。 [0005]本发明的原理： [0006]本发明检测原理是花青素的色调和色度随pH值的不同而发生改变,而干扰物质特 征光谱不随pH的改变而改变。 pH为1.0时,花青素以红色 的2‑苯基苯并吡喃的形式存在,pH 为4.5时,花青素以无色的甲醇假碱的形式存在。 结合朗伯 ‑比尔定律可得出,在两个不同的 pH值下,花青素溶液的吸光度的差值与花青素的含量成比例。 在波长530nm下检测， 用酶标 仪通过pH示差法测定试样中花青素的含量， 可以精确、 批量的进行检测。 [0007]为解决上述 技术问题， 本发明的技 术方案是： [0008]一种植物花青素的批量检测方法， 包括以下步骤： [0009]a.将待检测样品非食用部分(如植物果柄， 坚硬籽粒)去除， 将剩余部分在匀浆破 碎仪上破碎， 混匀； [0010]b.称取5g处理后样品， 加入提取液， 用容量瓶定容至100ml， 摇匀， 置于60～70℃下 超声波振荡40mi n， 得到花青素粗 提液； [0011]c.取5ml花青素粗提液， 8 000rpm离心5 min， 取上清2ml分别加入盛有10 ml pH1.0缓 冲液和10mlpH4.5缓冲液的容器中， 混匀， 置 于黑暗中静置2h； [0012]d.对酶标板96个微孔进行编号， 并分别移 取200 μL待测试溶液于酶标板的微孔中， 以蒸馏水作对照； 将不同样品、 同个样品不同pH值 缓冲液下的样品移取到相应的微孔中， 然 后用酶标仪测定 530nm波长下的吸光度；说　明　书 1/4 页 3 CN 115096833 A 3