ICS 67.100.01 X 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2070—2011 牛初乳及其制品中免疫球蛋白IgG的测定 分光光度法 Determination of immunoglobulin G in bovine colostrum and its products-Spectrophotometry 行业标准信息服务平台 2011-09-01发布 2011-12-01实施 中华人民共和国农业部 5发布 NY/T 2070—2011 前 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274)归口。 本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、东北农业大学。 本标准主要起草人：邵华、金茂俊、姜瞻梅、金芬、肖航、杨锚、王静、刘宁。 行业标准信息服务平台 I NY/T 2070—-2011 牛初乳及其制品中免疫球蛋白IgG的测定 分光光度法 1范围 本标准规定了牛初乳及其制品中免疫球蛋白IgG的测定方法。 本标准适用于牛初乳及其制品中免疫球蛋白IgG的测定。 本方法检出限：0.2mg/mL。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验用水规格和试验方法 3原理 微粒，使试液浊度发生变化，试液浊度与所含IgG抗原量成正比，在340nm测定免疫球蛋白IgG含量。 4试剂与材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。实验用水应符合GB/T6682规定的二级水 要求。 4. 10.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4) 取0.27g磷酸二氢钾（KHzPO4），2.86g磷酸氢二钠（NazHPO4·12H2O),0.20g氯化钾（KCI)， 8.80g氯化钠(NaCl)，水溶解后调pH至7.4,用蒸馏水定容至1000mL，置4℃保存。 4.24%聚乙二醇缓冲液 取40g聚乙二醇，加磷酸盐缓冲液（4.1）定容至1000mL，置4℃保存。 4.3IgG标准贮备液 称取0.010gIgG标准品，精确至0.0001g，用磷酸盐缓冲液（4.1)溶解并定容至10.0mL，摇匀。 此标准贮备液质量浓度为1.0mg/mL，置一18℃保存备用。 4.4IgG标准系列溶液 0.40mg/mL、0.50mg/mL、0.60mg/mL、0.70mg/mL和0.80mg/mL的IgG标准系列溶液，临用时配制。 4.5抗IgG抗体购备液 取10mg兔抗牛IgG抗体粉剂（效价≥10000)溶于2mL的磷酸盐缓冲液（4.1)中，每管分装成 100μL，置一18℃保存备用。 4.6抗IgG抗体稀释液 取100μL的抗体贮备液，加入4.9mL的聚乙二醇缓冲液（4.2）,将抗体稀释50倍。临用时配制。 5仪器与设备 5.1紫外分光光度计，340nm，配有微量比色皿。 5.2微量移液器。 1 NY/T 2070—2011 5.3反应管,0.5mL。 5.4冷冻离心机。 5.5分析天平，感量0.1mg和0.01g。 5.6恒温水浴锅。 6分析步骤 6.1试样制备 6.1.1液态牛初乳 取2.0mL液态牛初乳试样于离心管中，在1℃～5℃、5000r/min条件下离心30min。去上层脂 肪，取1.0mL脱脂牛初乳试样，用4%聚乙二醇缓冲液（4.2)稀释至100mL～200mL，混匀，备用。 6.1.2固态牛初乳 将固态牛初乳样品粉碎后，称取0.2g试样，精确至0.001g，加2.0mL水，混匀，在1℃～5℃、 5000r/min条件下离心30min。去上层脂肪，取1.0mL脱脂牛初乳试样，用4%聚乙二醇缓冲液（4.2） 稀释至50mL～100mL，混匀，备用。 6.2测定 6.2.1标准曲线的绘制 向各个反应管中加人250μL的抗IgG抗体稀释液（4.6），再分别取10μL浓度为0.20mg/mL、 0. 30 mg/mL、0. 40 mg/mL.0. 50 mg/mL、0. 60 mg/mL、0.70 mg/mL、0. 80 mg/mL的IgG标准系列溶 液（4.4)依次加人各反应管中，混匀后，置于37℃水浴中反应40min。以4%聚乙二醇缓冲液（4.2)进行 调零，在340nm波长下测定吸光值，以标准溶液浓度为横坐标、吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。 6.2.2试样的测定 向各个反应管中加入250μL的抗IgG抗体稀释液（4.6），再取10μL待测试样加人各反应管中，混 匀后，置于37℃水浴中反应40min。以4%聚乙二醇缓冲液（4.2)调整分光光度计的零点，在340nm波 长下，测定吸光值。根据标准曲线，计算待测试样中IgG含量。 6.3空白实验 采用脱脂乳为空白样品，按照6.1和6.2.2的步骤进行操作。 7结果计算 试样中IgG的含量以质量分数计，单位为克每百克（g/100g）或克每百毫升（g/100mL)表示，按 式（1)计算： (1) mX 1000 式中： 试样的质量或体积，单位为克（g)或毫升（mL）。 m β--被测液中 IgG的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL); V一试样稀释后的体积,单位为毫升(mL)。 息服务 计算结果保留两位有效数字。 8精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 2 NY/T 2070—2011 5.3反应管,0.5mL。 5.4冷冻离心机。 5.5分析天平，感量0.1mg和0.01g。 5.6恒温水浴锅。 6分析步骤 6.1试样制备 6.1.1液态牛初乳 取2.0mL液态牛初乳试样于离心管中，在1℃～5℃、5000r/min条件下离心30min。去上层脂 肪，取1.0mL脱脂牛初乳试样，用4%聚乙二醇缓冲液（4.2)稀释至100mL～200mL，混匀，备用。 6.1.2固态牛初乳 将固态牛初乳样品粉碎后，称取0.2g试样，精确至0.001g，加2.0mL水，混匀，在1℃～5℃、 5000r/min条件下离心30min。去上层脂肪，取1.0mL脱脂牛初乳试样，用4%聚乙二醇缓冲液（4.2） 稀释至50mL～100mL，混匀，备用。 6.2测定 6.2.1标准曲线的绘制 向各个反应管中加人250μL的抗IgG抗体稀释液（4.6），再分别取10μL浓度为0.20mg/mL、 0. 30 mg/mL、0. 40 mg/mL.0. 50 mg/mL、0. 60 mg/mL、0.70 mg/mL、0. 80 mg/mL的IgG标准系列溶 液（4.4)依次加人各反应管中，混匀后，置于37℃水浴中反应40min。以4%聚乙二醇缓冲液（4.2)进行 调零，在340nm波长下测定吸光值，以标准溶液浓度为横坐标、吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。 6.2.2试样的测定 向各个反应管中加入250μL的抗IgG抗体稀释液（4.6），再取10μL待测试样加人各反应管中，混 匀后，置于37℃水浴中反应40min。以4%聚乙二醇缓冲液（4.2)调整分光光度计的零点，在340nm波 长下，测定吸光值。根据标准曲线，计算待测试样中IgG含量。 6.3空白实验 采用脱脂乳为空白样品，按照6.1和6.2.2的步骤进行操作。 7结果计算 试样中IgG的含量以质量分数计，单位为克每百克（g/100g）或克每百毫升（g/100mL)表示，按 式（1)计算： (1) mX 1000 式中： 试样的质量或体积，单位为克（g)或毫升（mL）。 m β--被测液中 IgG的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL); V一试样稀释后的体积,单位为毫升(mL)。 息服务 计算结果保留两位有效数字。 8精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 2 NY/T 2070—2011 5.3反应管,0.5mL。 5.4冷冻离心机。 5.5分析天平，感量0.1mg和0.01g。 5.6恒温水浴锅。 6分析步骤 6.1试样制备 6.1.1液态牛初乳 取2.0mL液态牛初乳试样于离心管中，在1℃～5℃、5000r/min条件下离心30min。去上层脂 肪，取1.0mL脱脂牛初乳试样，用4%聚乙二醇缓冲液（4.2)稀释至100mL～200mL，混匀，备用。 6.1.2固态牛初乳 将固态牛初乳样品粉碎后，称取0.2g试样，精确至0.001g，加2.0mL水，混匀，在1℃～5℃、 5000r/min条件下离心30min。去上层脂肪，取1.0mL脱脂牛初乳试样，用4%聚乙二醇缓冲液（4.2） 稀释至50mL～100mL，混匀，备用。 6.2测定 6.2.1标准曲线的绘制 向各个反应管中加人250μL的抗IgG抗体稀释液（4.6），再分别取10μL浓度为0.20mg/mL、 0. 30 mg/mL、0. 40 mg/mL.0. 50 mg/mL、0. 60 mg/mL、0.70 mg/mL、0. 80 mg/mL的IgG标准系列溶 液（4.4)依次加人各反应管中，混匀后，置于37℃水浴中反应40min。以4%聚乙二醇缓冲液（4.2)进行 调零，在340nm波长下测定吸光值，以标准溶液浓度为横坐标、吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。 6.2.2试样的测定 向各个反应管中加入250μL的抗IgG抗体稀释液（4.6），再取10μL待测试样加人各反应管中，混 匀后，置于37℃水浴中反应40min。以4%聚乙二醇缓冲液（4.2)调整分光光度计的零点，在340nm波