ICS 67.100 X 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2547—2014 生鲜乳中黄曲霉毒素M筛查技术规程 Technical regulation of on-site screening aflatoxin M, in fresh milk 行业标准信息服务平台 2014-03-24发布 2014-06-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 2547—2014 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、农业部 油料及制品质量监督检验测试中心。 本标准主要起草人：李培武、郑楠、张奇、丁小霞、唐晓倩、张文、周海燕、李松励、王督、姜俊、张兆威， 行业标准信息服务平台 I NY/T2547—2014 生鲜乳中黄曲霉毒素M筛查技术规程 1范围 本标准规定了生鲜乳中黄曲霉毒素M筛查技术规程。 本标准适用于生鲜乳中黄曲霉毒素M的时间分辨免疫层析法的筛查。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3试剂 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 3.1水，按照GB/T6682中的要求，二级。 3.2甲醇(CH,OH)。 3.3铕标记黄曲霉毒素M抗体溶液：黄曲霉毒素Mi抗体纯度80%以上，与其他黄曲霉毒素交叉反 应率小于10%，抗体亲和力常数不低于1.00×108L/mol。 3.41000ng/mL黄曲霉毒素M标准溶液。 3.5100ng/mL黄曲霉毒素M，标准储备液：准确吸取黄曲霉毒素标准溶液（3.4)1.0mL于10mL容 量瓶中，甲醇定容。4℃保存（有效期：90d)，备用。 警告： 由于黄曲霉毒素毒性很强，试验人员应注意自我保护。操作时，应避免吸入、接触黄曲霉毒素标准溶液。配制标准 溶液应在通风橱内进行，工作时应戴眼镜、穿工作服、戴医用乳胶手套。凡接触黄曲霉毒素的容器，需浸泡于10%次氯酸 储备液。 4仪器设备与材料 4.1时间分辨荧光检测仪：激发波长为（365±5）nm，检测波长为（615士5）nm。 用于样品中黄曲霉毒素M与销标记抗体预反应后再与黄曲霉毒素BSA偶联物反应的载体；不得出 现假阴性，假阳性率低于<15%。 1 NY/T 2547—2014 (a)正视图 (b)侧视图 说明： 1——底板； 4—样品垫； 2—吸水垫； 5—质控线； 3—硝酸纤维素膜； 6-检测线。 图1黄曲霉毒素M，免疫层析装置示意图 4.2.1AFM,-BSA偶联率为(1：5)～(1：20)(BSA：AFM)。 4.2.2样品垫：玻璃纤维、聚酯纤维或纸质薄片等。 4.2.3硝酸纤维素膜：4cm毛细时间不小于75s。 行业标准信息服务平台 4.2.4吸水纸。 4.2.5底板。 4.2.6连接胶带。 4.3恒温装置：37.0±2.0)℃。 4.4漩涡混合器。 4.5微量移液器：20μL~200μL，100μL~1000 4.6分析天平：感量为0.01g。 4.7水浴锅。 4.810mL移液管。 4.950mL烧杯。 5抽样 5.1抽样人员应熟知抽样程序和方法。 5.2抽样人员应准备相应的工具和包装容器。抽样工具和包装容器应清洁、干燥，不会对样品造成污 染。 5.3样品应从足够量的同批产品中随机抽取。若用大桶或奶罐盛装的，应充分混匀后再采样。 2 NY/T25472014 5.4通常抽样量不低于300mL，分样成3份，其中一份做检验样，一份做复检样，一份做备用样品，分 别盛放3个容器中。 6黄曲霉毒素筛查 6.1在室温条件下，取150.0μL标记的黄曲霉毒素M抗体溶液（3.3）于1.5mL样品瓶，备用。 6.2用分析天平（4.6)准确称取10.0g样品至50mL烧杯中（精确至0.1g），混匀备用。 6.3取300.0uL样品（6.2)，垂直滴加于样品瓶（6.1)内，漩涡混合5s。取出黄曲霉毒素M免疫层析 装置（4.2），按箭头方向插人加样后的样品瓶中，将样品瓶置于恒温装置中，37℃反应6min。 6.4取出黄曲霉毒素M免疫层析装置（4.2),上机(4.1)检测。 6.5取阴性生鲜乳样品，将黄曲霉毒素M标准储备溶液（3.5）配制为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.3 ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL的系列标准工作液，由低到高浓度进行（6.3、6.4）检测，根 据检测线T信号值与质控线C信号值的比值（T/C)和标准溶液浓度的自然对数值（lnc）建立标准曲线。 7结果计算 7.1结果计算与表示 试样中黄曲霉毒素Mi含量以质量分数X计，数值以微克每千克（ug/kg）表示，按式（1)计算。 :(1) m 式中： p—从标准曲线上查得的测定液中黄曲霉毒素含量的数值，单位为纳克每毫升(ng/mL)； V一样品测定液体积的数值，单位为毫升（mL)； n一一试样稀释倍数的数值； 试样质量的数值，单位为克（g）。 m 计算结果保留小数点后两位。 7.2重复性 在重复性条件下，获得两次独立测定结果的绝对差值应不大于0.10μg/kg。 7.3再现性 在再现性条件下，获得两次独立测定结果的绝对差值应不大于0.20μg/kg。 8筛查结果确认 生鲜乳中黄曲霉毒素Mi筛查结果大于0.45ug/kg时，应采用免疫亲和层析净化高效液相色谱法 息服务平台 进行结果确认。 3 NY/T25472014 5.4通常抽样量不低于300mL，分样成3份，其中一份做检验样，一份做复检样，一份做备用样品，分 别盛放3个容器中。 6黄曲霉毒素筛查 6.1在室温条件下，取150.0μL标记的黄曲霉毒素M抗体溶液（3.3）于1.5mL样品瓶，备用。 6.2用分析天平（4.6)准确称取10.0g样品至50mL烧杯中（精确至0.1g），混匀备用。 6.3取300.0uL样品（6.2)，垂直滴加于样品瓶（6.1)内，漩涡混合5s。取出黄曲霉毒素M免疫层析 装置（4.2），按箭头方向插人加样后的样品瓶中，将样品瓶置于恒温装置中，37℃反应6min。 6.4取出黄曲霉毒素M免疫层析装置（4.2),上机(4.1)检测。 6.5取阴性生鲜乳样品，将黄曲霉毒素M标准储备溶液（3.5）配制为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.3 ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL的系列标准工作液，由低到高浓度进行（6.3、6.4）检测，根 据检测线T信号值与质控线C信号值的比值（T/C)和标准溶液浓度的自然对数值（lnc）建立标准曲线。 7结果计算 7.1结果计算与表示 试样中黄曲霉毒素Mi含量以质量分数X计，数值以微克每千克（ug/kg）表示，按式（1)计算。 :(1) m 式中： p—从标准曲线上查得的测定液中黄曲霉毒素含量的数值，单位为纳克每毫升(ng/mL)； V一样品测定液体积的数值，单位为毫升（mL)； n一一试样稀释倍数的数值； 试样质量的数值，单位为克（g）。 m 计算结果保留小数点后两位。 7.2重复性 在重复性条件下，获得两次独立测定结果的绝对差值应不大于0.10μg/kg。 7.3再现性 在再现性条件下，获得两次独立测定结果的绝对差值应不大于0.20μg/kg。 8筛查结果确认 生鲜乳中黄曲霉毒素Mi筛查结果大于0.45ug/kg时，应采用免疫亲和层析净化高效液相色谱法 息服务平台 进行结果确认。 3 NY/T25472014 5.4通常抽样量不低于300mL，分样成3份，其中一份做检验样，一份做复检样，一份做备用样品，分 别盛放3个容器中。 6黄曲霉毒素筛查 6.1在室温条件下，取150.0μL标记的黄曲霉毒素M抗体溶液（3.3）于1.5mL样品瓶，备用。 6.2用分析天平（4.6)准确称取10.0g样品至50mL烧杯中（精确至0.1g），混匀备用。 6.3取300.0uL样品（6.2)，垂直滴加于样品瓶（6.1)内，漩涡混合5s。取出黄曲霉毒素M免疫层析 装置（4.2），按箭头方向插人加样后的样品瓶中，将样品瓶置于恒温装置中，37℃反应6min。 6.4取出黄曲霉毒素M免疫层析装置（4.2),上机(4.1)检测。 6.5取阴性生鲜乳样品，将黄曲霉毒素M标准储备溶液（3.5）配制为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.3 ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL的系列标准工作液，由低到高浓度进行（6.3、6.4）检测，根 据检测线T信号值与质控线C信号值的比值（T/C)和标准溶液浓度的自然对数值（lnc）建立标准曲线。 7结果计算 7.1结果计算与表示 试样中黄曲霉毒素Mi含量以质量分数X计，数值以微克每千克（ug/kg）表示，按式（1)计算。 :(1) m 式中： p—从标准曲线上查得的测定液中黄曲霉毒素含量的数值，单位为纳克每毫升(ng/mL)； V一样品测定液体积的数值，单位为毫升（mL)； n一一试样稀释倍数的数值； 试样质量的数值，单位为克（g）。 m 计算结果保留小数点后两位。 7.2重复性 在重复性条件下，获得两次独立测定结果的绝对差值应不大于0.10μg/kg。 7.3再现性 在再现性条件下，获得两次独立测定结果的绝对差值应不大于0.20μg/kg。 8筛查结果确认 生鲜乳中黄曲霉毒素Mi筛查结果大于0.45ug/kg时，应采用免疫亲和层析净化高效液相色谱法 息服务平台 进行结果确认。