ICS 67.120 X 22 GE 中华人民共和国国家标准 GB/T 22338—2008 动物源性食品中氯霉素类药物 残留量测定 Determination of multi-residues of chloramphenicols in animal-original food 2008-09-01发布 2008-12-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22338—2008 前言 本标准的附录A、附录B、附录 C、附录D和附录E均为资料性附录。 本标准由中华人民共和国质量监督检验检疫总局提出。 本标准由国家认证认可监督管理委员会归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：邱月明、林黎明、李鹏、张鸿伟、赵海香、董益阳、蔡慧霞、谢孟峡、汪丽萍、孔莹。 GB/T22338—2008 动物源性食品中氯霉素类药物 残留量测定 1范围 SAIC 本标准规定了动物源性食品中氯霉素类残留量的气相色谱-质谱和液相色谱-质谱/质谱测定 方法。 本标准适用于水产品、畜禽产品和畜禽副产品中氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素残留的定性确证和 定量测定。 2气相色谱-质谱法 2.1原理 样品用乙酸乙酯提取，4%氯化钠溶液和正已烷液-液分配净化，再经弗罗里硅土（Florisil）柱净化 于70℃硅烷化，用气相色谱/负化学电离源质谱测定，内标工作曲线法定量。 2.2试剂和材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和二次去离子水或相当纯度的水 2.2.1甲醇：色谱纯。 2.2.2甲苯：农残级。 2.2.3正已烷：农残级。 2.2.4乙酸乙酯。 2.2.5乙醚。 2.2.6氯化钠。 2.2.7 氯霉素（CAP）、氟甲砜霉素（FF)、甲霉素（TAP)标准物质：纯度≥99%。 2.2.8间硝基氯霉素（m-CAP)标准物质：纯度≥99%。 2.2. 9 氯化钠溶液（4%）：称取适量氯化钠用水配置成4%的氯化钠溶液，常温保存，可使用1周 2. 2. 10 氯霉素类标准储备溶液：准确称取适量氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素标准物质（精确到 0.1mg），以甲醇配制成浓度为100μg/mL的标准储备溶液。 2.2.11间硝基氯霉素内标工作溶液：准确称取适量间硝基氯霉素标准物质（精确到0.1mg），用甲醇 配制成10ng/mL的标准工作溶液。 2.2.12氯霉素类基质标准工作溶液：选择不含氯霉素类的样品六份，分别添加1mL内标工作溶液 （2.2.11)，用这六份提取液分别配成氯霉素、氟甲矾霉素和甲砜霉素浓度为0.1ng/mL、0.2ng/mL 1ng/mL2ng/mL、4ng/mL、8ng/mL的溶液，按本方法提取（2.4.1）、净化（2.4.2），制成样品提取液， 用氮气缓慢吹干，硅烷化（2.4.3）后，制成标准工作溶液 2.2.13衍生化试剂：N，O双（三甲基硅基）三氟乙酰胺-三甲基氯硅烷（BSTFA十TMCS，99十1） 2.2.14固相萃取柱：弗罗里硅土柱（6.0mL，1.0g）。 2.3仪器和设备 2.3.1气相色谱/质谱联用仪：配有化学电离源（CI）。 2.3.2组织捣碎机。 1 GB/T22338—2008 2.3.3固相萃取装置。 2.3.4振荡器。 2.3.5旋转蒸发仪。 2.3.6涡旋混合器。 2.3.7离心机。 2.3.8恒温箱。 2.4测定步骤 2.4.1提取 称取10g（精确到0.01g）粉碎的组织样品于50mL具塞离心管中，加入1.0mL内标溶液 （2.2.11）和30mL乙酸乙酯，振荡30min，于4000r/min离心2min，上层清液转移至圆底烧瓶中，残 渣用30mL乙酸乙酯再提取一次，合并提取液，35℃旋转蒸发至1mL～2mL，待净化。 2.4.2净化 2.4.2.1液-液萃取 提取液浓缩物（2.4.1)加1mL甲醇溶解，用20mL氯化钠溶液（2.2.9）和20mL正已烷液-液萃 取，弃去正已烷层，水相用40mL乙酸乙酯分两次萃取，合并乙酸乙酯相于心形瓶中，35℃旋转蒸发至 近干，用氮气缓慢吹干。 2.4.2.2弗罗里硅土柱净化 弗罗里硅土柱依次用5mL甲醇、5mL甲醇-乙醚（3+7）溶液和5mL乙醚淋洗备用。将残渣 （2.4.2.1）用5.0mL乙醚溶解上样，用5.0mL乙醚淋洗Florisil柱，5.0mL甲醇-乙醚溶液（3+7）洗 脱，洗脱液用氮气缓慢吹干，待硅烷化。 2.4.3硅烷化 净化后的试样（2.4.2.2)用0.2mL甲苯溶解，加入0.1mL硅烷化试剂（2.2.13）混合，于70℃衍 生化60min。氮气缓慢吹干，用1.0mL正已烷定容，待测定。 2.4.4测定 2.4.4.1气相色谱-质谱条件 a) 色谱柱：DB-5MS毛细管柱，30mX0.25mm（内径）X0.25μm，或与之相当者； 色谱柱温度：50℃保持1min，25℃/min升至280℃，保持5min； c) 进样口温度：250℃； d) 进样方式：不分流进样，不分流时间0.75min； e) 载气：高纯氨气，纯度≥99.999%； 流速：1.0mL/min; g) 进样量：1.0μL； h) 接口温度：280℃； D 离子源：化学电离源负离子模式NCI； 扫描方式：选择离子监测； 离子源温度：150℃； 1) 四级杆温度：106℃； m) 反应气：甲烷，纯度≥99.999%； 选择监测离子参见表1。 2 GB/T22338—2008 监测离子 药物名称 监测离子（m/z) 定量离子(m/z) 相对离子丰度比/% 允许相对误差/% 466 100 468 66 ±20% 间硝基氯霉素 466 470 16 ±30% 432 2 ±50% 466 100 468 71 ±20% 氯霉素 466 376 32 ±25% 378 19 ±30% 339 100 341 75 ±20% 氟甲矾霉素 339 429 89 ±20% 431 84 ±20% 409 100 411 93 ±20% 甲霉素 409 499 92 ±20% 501 93 ±20% 2.4.4.2定性测定 进行试样测定时，如果检出色谱峰的保留时间与标准物质相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图 中，所选择的离子均出现，而且所选择离子的相对离子丰度比与标准物质一致，相对丰度允许偏差不超 过表1规定的范围，则可判断样品中存在对应的三种氯霉素。如果不能确证，应重新进样，以扫描方式 （有足够灵敏度）或采用增加其他确证离子的方式来确证。 2.4.4.3内标工作曲线 用配制的基质标准工作溶液（2.2.12)按2.4.4.1的气相色谱-质谱条件分别进样，以标准溶液浓度 为横坐标，待测组分与内标物的峰面积之比为纵坐标绘制内标工作曲线。 2.4.4.4定量 以m/z466（m-CAP和CAP）、339（FF)和409（TAP为定量离子，样品溶液中氯霉素类衍生物的响 应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下（2.4.4.1），m-CAP、CAP、FF、TAP标准物质 衍生物参考保留时间约为11.4min、11.8min、12.6min、13.6min。氯霉素类标准物质衍生物总离子 流图和质谱图参见附录A中的图A.1和图A.2。 2.4.5平行实验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。 2.4.6空白实验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。 2.5结果计算 结果按式(1)计算： X=CXV (1) m 式中： X——试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（μg/kg）； 从内标标准工作曲线上得到的被测组分浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； V- 试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）； 试样的质量，单位为克（g）。 3