ICS65.020.01 B16T/GDP 广东省农药协会团体标准 T/GDP029—2021 草地贪夜蛾人工养殖技术规程 TechnicalspecificationsforartificialbreedingofSpodopterafrugiperda 2021-4-16发布 2021-4-16实施 广东省农药协会发布 全国团体标准信息平台 T/GDP029—2021 I前  言 本标准按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定编制。 本标准由广东省农药协会提出。 本标准由广东省农药协会归口。 本标准起草单位：华南农业大学、广州市金农科技开发有限公司、广东宇农生物科技有限公司。 本标准的主要起草人为：徐汉虹、张志祥、吴吉英子、黄长安、张欣倩、章婉贤、杨文。 本标准为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/GDP029—2021 1草地贪夜蛾人工养殖技术规程 1范围 本标准规定了草地贪夜蛾的室内人工养殖技术。 本标准适用于草地贪夜蛾卵、幼虫、蛹、成虫的室内人工批量养殖。 2规范性引用文件 GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》 3术语 下列术语和定义适用于本规程。 3.1草地贪夜蛾Spodopterafrugiperda(Smith) 也称秋黏虫,隶属于鳞翅目Lepidoptera夜蛾科Noctuidae灰翅夜蛾属Spodoptera，原产于美洲热带 和亚热带地区,为害多种作物,是重要的农业害虫。具有迁飞速度快、繁殖能力强、暴食危害重及防治 难度大等特点。草地贪夜蛾形态学特征参见附录A，生活史参见附录B。 3.2人工养殖artificialbreeding 人工培育和繁殖动植物的过程。本规程中特指利用人工饲料室内养殖草地贪夜蛾的过程。 3.3种虫provenanceofinsect 采集田间个体较大、无破口、磨损和被寄生蛀孔的优质健壮草地贪夜蛾卵块5-10个，或者虫体健壮、 活动能力强、大小一致或接近一致的5-6龄幼虫100-300头，作为种虫。 3.4复壮rejuvenation 通过一定的方法和技术，使人工养殖数代后发生退化的草地贪夜蛾的各项指标恢复到正常水平的过 程。 4饲养场所 4.1饲养室 4.1.1要求 饲养室应配备可调节温度、湿度、光照的设备和紫外消毒设备，并能够保温、保湿、通风、透光、 防虫、防鼠；墙壁、地面应易清洗、消毒并保持清洁卫生；杀虫剂及其他挥发性药物不得携带入内；不 得有粉尘、有害气体和其它扩散性污染源。 全国团体标准信息平台 T/GDP029—2021 24.1.2消毒 4.1.2.1紫外消毒 在开始规模化饲养前，将饲养室内其它养殖昆虫移出，用75%酒精溶液喷洒柜台、桌面、地面和工 具后，进行紫外消毒30-60min。 消毒使用的紫外线是C波紫外线，其波长范围是200～280nm，杀菌作用最强的波段是260～265nm； 用于消毒的紫外线灯在电压为220V、环境相对湿度为60%、温度为20℃时，辐射的253.7nm紫外线强度不 得低于70uW/cm2。 注意紫外消毒时人不得进入房间，需等关闭紫外后开空调或打开门窗通风30min后方可进入。 4.1.2.2甲醛熏蒸消毒 如出现虫体被病毒、白僵菌、绿僵菌、线虫或其它病原微生物感染的情况，则饲养室需要用甲醛熏 蒸消毒。 按每10m3用5mL甲醛和1g高锰酸钾的量，将甲醛和高锰酸钾分别用100mL或200mL的烧杯盛装， 并用双层纱布盖住盛装甲醛的烧杯口。在相对湿度65%以上、温度24-40℃的条件下，将甲醛倒入装有 高锰酸钾的烧杯中，快速离开房间。饲养室持续密闭熏蒸12h，熏蒸结束后打开所有门窗通风24h，待 气体完全散去，再用75%酒精溶液擦拭桌台、工具后方可使用。 4.2饲养盒 用于草地贪夜蛾初孵至2龄末幼虫的饲养以及卵块、蛹的集中放置，用长15-20cm、宽10-15cm、高 5-7cm的透明塑料盒即可，需在盖子上开10-15个直径3mm左右的圆孔。饲养盒使用前应置于高压灭菌锅 中121℃高压灭菌20min，或用75%酒精溶液擦拭。 4.3饲养管 草地贪夜蛾2龄末以后的幼虫需要单管饲养，用高6-9cm、直径3-5cm的透明塑料指形管即可，需在 盖子上开2-7个直径3mm左右的圆孔。饲养管使用前应置于高压灭菌锅中121℃高压灭菌20min，或用75% 酒精溶液浸泡1min后晾干。 4.4饲养笼 草地贪夜蛾成虫的饲养需用到干净的长40-80cm、宽40-60cm、高40-60cm的饲养笼。饲养笼其中一 个侧面设置一个可活动的粘贴门（长10-20cm、宽10-20cm），以方便放置玉米叶片、替换食物和收集 卵块，其余各侧面为80-100目纱网，顶部和底部为金属板或木板。一个饲养笼可饲养40-80头成虫。饲 养笼使用前用75%酒精溶液擦拭。 4.5饲养筒 草地贪夜蛾成虫饲养量不大的情况下，可将干净的A4纸卷成纸筒（高21cm、直径9cm），并在两端 盖上塑料培养皿固定，竖直放置。每个饲养筒可放置1-3头雄蛹和1-3头雌蛹，羽化后受精交配产卵。 5其他工具、仪器和其他相关用品 5.1成虫饲料器皿 全国团体标准信息平台 T/GDP029—2021 3草地贪夜蛾蛹羽化前，在饲养笼或饲养筒底部放置1-2个塑料培养皿，皿内放置吸足10%蜂蜜水的脱 脂棉（铺满培养皿底部），供成虫食用。培养皿可根据饲养笼或饲养筒的大小选择合适的规格，若用饲 养笼可选择直径75mm或90mm的培养皿，若用饲养筒可选择直径35mm的培养皿。 5.2移动工具 不可直接用手接触虫体，可用消毒后的镊子或毛笔移动卵块、幼虫和蛹。毛笔或镊子使用后用75% 酒精溶液浸泡1min后晾干，或置于高压灭菌锅中121℃高压灭菌20min，并用干净的塑料袋装好以备下次 使用。 5.3仪器 电子天平、高速打碎机、高压灭菌锅、超净台、电磁炉、锅等。 5.4其他用品 标签纸、滤纸、脱脂棉、厨房纸、玻璃棒、烧杯、饲料盆、塑料保鲜盒等。除了标签纸，其他用品 使用前均需置于高压灭菌锅中121℃高压灭菌20min。 6人工饲料配方 6.1成虫人工饲料（10%蜂蜜水脱脂棉） 草地贪夜蛾蛹羽化将脱脂棉浸入10%蜂蜜水中，均匀地浸透脱脂棉，以拿起脱脂棉不滴液为宜。 6.2幼虫人工饲料 6.2.1饲料配方 人工饲料的主要成分为黄豆粉、玉米粉、酵母粉、琼脂、干酪素、胆固醇、肌醇、山梨酸、氯化胆 碱、复合维生素、对羟基苯甲酸酯、蒸馏水，配方用量见表1。 该配方以实验室常用的夜蛾饲料为基础，并根据草地贪夜蛾的需求对原材料和添加剂进行优化，能 完全满足草地贪夜蛾幼虫生长的营养元素需求。 表1草地贪夜蛾人工饲料配方表 成分 用量 成分 用量 黄豆粉(g)Soymealpowder 125肌醇(g)Inose 0.1 玉米粉(g)Maizepowder 225山梨酸(g)Sorbicacid 6 酵母粉(g)Yeastpowder 40氯化胆碱(g)Cholinechloride 3 琼脂(g)Agar 30复合维生素(g)Multi-vitamins 7 干酪素(g)Casein 20对羟基苯甲酸甲酯(g)Methylparaben 7.5 胆固醇(g)Cholesterol 0.6蒸馏水(ml)Distilledwater 1500 6.2.2饲料制作 按表1配方分别称取黄豆粉和玉米粉于饲料盆中,加入500mL蒸馏水，用玻璃棒充分搅拌10min，加盖 置于高压灭菌锅中121℃高压灭菌20min。 全国团体标准信息平台 T/GDP029—2021 4准确称取30g琼脂于锅中，加入1000mL蒸馏水，在电磁炉上加热并匀速地搅拌。待琼脂在水中完全 溶化呈透明状时停止加热,加入上一步骤中已灭菌的饲料匀速搅拌。 将配方中的酵母粉、干酪素、胆固醇、肌醇、山梨酸、氯化胆碱、复合维生素、对羟基苯甲酸甲酯 等混合均匀并研磨成粉，待琼脂溶液降至60℃以下后加入其中，搅拌均匀后用高速打碎机将上述配制的 饲料均匀打碎，倒入已消毒的塑料保鲜盒中，厚度控制为2-3cm，用盖子密封，待饲料冷却至室温后， 放置于4℃冰箱中冷藏待用。在已消毒的饲养盒中平铺一层0.5-1cm厚的饲料，盖上盖子，并用保鲜膜 封住盖子上的圆孔，放4℃冰箱冷藏，作为初孵幼虫的饲养场所备用。饲料从冰箱取出后应先等其温度 恢复至室温后再使用。 7人工养殖过程 7.1养殖条件 在人工养殖过程中，除试验供虫以外，室内传代养殖的草地贪夜蛾不能离开饲养室。养殖条件为温 度26℃±0.5℃、相对湿度65%±5%、光周期L∶D=16h∶8h、光照强度8000lx。 7.2卵的集中放置 将饲养笼或饲养筒中当天雌蛾产在玉米叶片、保鲜膜或褶皱红色塑料纸上的卵块或在田间采集的卵 块，沿着卵块边缘将玉米叶片、保鲜膜或褶皱红色塑料纸剪下，用镊子夹住边缘，将卵块置于低浓度 （0.5%-1%）的次氯酸钠水溶液中浸泡5s左右取出，用滤纸吸干表面，置于培养皿中，在干燥、阴凉、 通风处晾干，集中平铺放在消毒的饲养盒内，并用标签纸记录产卵或采集时间。待卵块变成褐色时，取 一块放入新的消毒饲养盒待其孵化。 7.3幼虫饲养 7.3.1初孵幼虫的饲养 饲养盒内幼虫孵出后，用消毒的毛笔将初孵幼虫转移至铺有饲料的饲养盒中饲养。每个饲养盒可放 入初孵幼虫150-200头。盖口加上一层高温灭菌的厨房纸，确保厨房纸完全盖住盖口，再盖上已开好圆 孔的盖子。持续喂养。 7.3.22龄末以后幼虫的饲养 草地贪夜蛾幼虫生长至2龄末以后需单管饲养，用消毒的毛笔分装到消毒的饲养管中，每管一头， 并放置一块长2-3cm、宽1