ICS 11.020 C 59 团体标准 T/CPMA 008—2020 艰难梭菌感染诊断 Diagnosis of Clostridioides difficile infection 2020 -07-01发布 2020 -10-01实施 中华预防医学会 发 布 全国团体标准信息平台 T/CPMA 008-2020 I 目 次 前言 ........................................................................ II 引言 ....................................................................... III 1 范围 ....................................................................... 1 2 术语和定义 ................................................................. 1 3 缩略语 ..................................................................... 1 4 诊断依据 ................................................................... 2 5 诊断原则 ................................................................... 3 6 诊断 ....................................................................... 3 7 鉴别诊断 ................................................................... 3 附录A（资料性附录）样本的核酸检测 ............................................ 5 附录B (规范性附录) 艰难梭菌 的分离培养和鉴定 .................................. 7 附录C (规范性附录) 高毒株 RT027和RT078型艰难梭菌的鉴定 ..................... 10 参考文献 .................................................................... 13 全国团体标准信息平台 T/CPMA 008-2020 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1- 2009给出的规则起草。 本标准由中华预防医学会归口。 本标准起草单位：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所、 中国人民解放军总医院、云南省疾病 预防控制中心、中国医学科学院北京协和医院、中南大学湘雅医院、复旦大学附属华山医院、四川大学 华西医院、杭州医学院、河北医科大学第二医院、南方医科大学南方医院、内蒙古自治区人民医院、山东省立医院。 本标准主要起草人： 吴媛、卢金星、闫中强、刘运喜、古文鹏、伏晓庆、徐英春、吴安华、黄海辉、 宗志勇、金大智、赵建宏、陈烨、刘卫平、李卫光。 全国团体标准信息平台 T/CPMA 008-2020 III 引 言 艰难梭菌 ，即难辨梭状芽孢杆菌， 是引起抗生素相关性腹泻的重要病原，艰难梭菌感染成为医院获 得性腹泻的主要病因，已在欧美国家引起多起暴发流行。美国疾病预防控制中心 2017年数据显示，美国 每年艰难梭菌感染患者近 23万人，其中死亡人数至少超 1.2万人，产生超10亿美元的疾病负担，因此被 列为紧迫的公共卫生威胁之一。近十年来调查研究显示，我国艰难梭菌感染呈快速增长趋势。然而，由 于缺乏统一的诊断原则和检测技术规范，我国艰难梭菌感染率和疾病负担尚不明确。为了规范艰难梭菌感染流行病学调查，提高艰难梭菌诊断的准确性， 本标准遵循科学性和实用性原则， 对艰难梭菌感染诊 断所需的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断进行明确规定。 全国团体标准信息平台 T/CPMA 008-2020 1 艰难梭菌感染诊断 1 范围 本标准规定了艰难梭菌感染的诊断依据、诊断原则、诊断及鉴别诊断。 本标准适用于医疗卫生机构开展艰难梭菌感染的诊断和流行病学调查 。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 腹泻 diarrhea 24 h内排便次数在 3次或以上，不成形便，且伴有粪便性状异常。 2.2 伪膜性肠炎 pseudomembranous colitis 主要发生在结肠和小肠的急性纤维素渗出性炎症，多是在应用抗菌药物后导致正常肠道菌群失调， 艰难梭菌大量繁殖，产生毒素而致。 3 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 BHI：脑心浸液 (Brain heart infusion) CDI：艰难梭菌感染 (Clostridioides difficile infec tion) CCTA：细胞毒性试验 (cell cytotoxicity assay) CCFA：环丝氨酸 -头孢西丁- 果糖琼脂( cycloserine- cefoxitin -fructose agar ) CDMN：艰难梭菌拉氧头孢诺氟沙星琼脂(Clostridium difficile Moxalactam Norfloxacin agar) EIA：酶免疫分析(Enzyme immunoassay) GDH：谷氨酸脱氢酶 (Glutamate dehydrogenase) MLST：多位点序列分型(Mul ti-locus sequencing typing) NAAT：核酸扩增检测 (Nucleic acid amplification testing) TCD：产毒艰难梭菌 (Toxingenic Clostridioides difficile ) RT：核糖体分型(Ribo -typing) 全国团体标准信息平台 T/CPMA 008-2020 2 4 诊断依据 4.1 危险因素 使用抗菌药物、住院 史、老年 （≥65岁）、使用质子泵抑制剂、化疗、患有慢性肾脏疾病、管饲或 其他免疫功能缺陷 等。 4.2 临床表现 症状可由单一腹泻到发热、腹痛、腹胀、 恶心和呕吐等全身性感染症状， 重症患者出 现伪膜性肠炎， 严重的并发症有中毒性巨结肠、肠梗阻、肠穿孔和休克等。 分为轻中度、重度和重度伴并发症： a) 轻中度：腹泻无全身感染表现（白细胞计数 <15×109 /L，血肌酐 <基线 1.5倍）； b) 重度：腹泻合并全身感染表现（白细胞计数≥ 15×109 /L，血肌酐 ≥基线 1.5倍），出现伪膜性肠 炎； c) 重度伴并发症：腹泻合并全身性感染症状，同时出现并发症包括中毒性巨结肠、低血压或肠梗 阻。 4.3 内镜检查 下消化道内镜检查提示伪膜性肠炎，主要表现为直肠和乙状结肠黏膜表面多发性、隆起的灰绿色或 黄褐色斑片。 4.4 实验室检查 4.4.1 生物安全要求 根据原卫生部 《人间传染的病原微生物名录》 （卫科教发 [2006]15 号），艰难梭菌的危害程度属于第 三类，涉及样本检测和活菌的实验操作在 BSL-2级实验室中进行，采用 B类（UN3373 ）包装运输 。 4.4.2 粪便样本采集、运输 患者在干燥清洁便盆内自然排便（避免使用坐式或蹲式马桶），用无菌采便管 /盒挑取大便中异常 的部分（有黏液、脓液或血液的部分）4g~6g ；液体粪便 ≥5 mL。 采集的样本需尽快送检培养；4 ℃保存， 24h内完成免疫学检测。 4.4.3 样本的快速检测 腹泻样本无需培养， 可直接采用商品化的试剂盒对样本中的谷氨酸 脱氢酶 (GDH)抗原和毒素 A/B 同时进行检测， 如果二者结果不一致，需结合 PCR检测 tcdB基因，判断样本中有无产毒艰难梭菌。结 果判读： a) GDH+/毒素 +：样本中存在产毒艰难梭菌； b) GDH+/毒素 -：PCR检测 tcdB基因， tcdB+则样本中存在产毒艰难梭菌 ，tcdB -则样本中无产毒 艰难梭菌； 全国团体标准信息平台 T/CPMA 008-2020 3 c) GDH -/毒素 +：PCR检测 tcdB基因， tcdB+则样本中存在产毒艰难梭菌， tcdB-则样本中无产毒 艰难梭菌； d) GDH -/毒素-：样本中无艰难梭菌。 4.4.4 样本的核酸检测 疑似 CDI的腹泻样本，无需培养，提取样本 DNA进行艰难梭菌特异的细胞毒素基因 tcdB 核酸片 段检测，如果阳性，说明样本中存在产毒艰难梭菌。详细的试验流程参见附录 A。 或采用商品化的试剂盒进行 tcdB 基因的荧光定量 PCR检测。 4.4.5 细胞毒性试验 （CCTA） 将不成形粪便样本，1500 g 离心， 5min~10 min，上清 液经0.45μm滤膜过滤， 将粪便滤液与 Vero 细胞共孵育， 分别加入抗